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标题:【求助】如何克隆启动子

粉色萤火虫[使用道具]
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发表于 2014-10-26 21:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】如何克隆启动子


我克隆出来了一个基因的全长，想克隆基因的启动子，想问下有没有哪位大侠克隆过启动子的，大家交流一下，用试剂盒的也可以，不是用试剂盒也可以的。麻烦大家了！
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XYZQ[使用道具]
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发表于 2014-10-26 21:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


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原帖由 粉色萤火虫 于 2014-10-26 21:58 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

我克隆出来了一个基因的全长，想克隆基因的启动子，想问下有没有哪位大侠克隆过启动子的，大家交流一下，用试剂盒的也可以，不是用试剂盒也可以的。麻烦大家了！ ...

是植物还是动物？
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wzqzy[使用道具]
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发表于 2014-10-26 21:59 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

有很多根据已知序列扩增上下游未知序列的方法，Tail PCR,SEFA PCR等等。
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发表于 2014-10-26 21:59 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


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原帖由 XYZQ 于 2014-10-26 21:58 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

是植物还是动物？

克隆盐藻的，是植物的
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发表于 2014-10-26 21:59 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


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原帖由 wzqzy 于 2014-10-26 21:59 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

有很多根据已知序列扩增上下游未知序列的方法，Tail PCR,SEFA PCR等等。

我想用热不对称PCR，但是不知道那个随机简并引物（AD）如何来的
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XYZQ[使用道具]
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发表于 2014-10-26 22:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
那个就用原作者论文或者别人已经发表的论文中的就可以。不过据说Tail PCR效果要差些
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发表于 2014-10-26 22:01 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #6 XYZQ 的帖子

我看到的文献都是说TAIL-PCR，效果如何好，简便灵敏度高，请问你克隆过启动子吗？
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XYZQ[使用道具]
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发表于 2014-10-26 22:01 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


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原帖由 粉色萤火虫 于 2014-10-26 22:01 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
我看到的文献都是说TAIL-PCR，效果如何好，简便灵敏度高，请问你克隆过启动子吗？

用SEFA PCR吧
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wanglaoshi[使用道具]
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发表于 2014-10-26 22:02 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

直接在NCBI上查出该基因组promoter序列，提取genomic DNA，根据序列设计引物再做普通的PCR不就行了吗
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粉色萤火虫[使用道具]
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发表于 2014-10-26 22:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


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原帖由 wanglaoshi 于 2014-10-26 22:02 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

直接在NCBI上查出该基因组promoter序列，提取genomic DNA，根据序列设计引物再做普通的PCR不就行了吗

我是克隆未知启动子的
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