【求助】PCR条带太浅，试了很多原因都没有改进

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标题:【求助】PCR条带太浅，试了很多原因都没有改进

boom[使用道具]
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发表于 2014-10-26 22:14 资料个人空间短消息加为好友

小中大

PCR条带太浅，试了很多原因都没有改进。直接上图，求大神指教

附件

2014-10-26 22:14

9.jpg (22.7 KB)

standbyme[使用道具]
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发表于 2014-10-26 22:14 资料个人空间短消息加为好友

小中大

1. 是不是你的胶染色不行啊，连marker都挺浅的，加大染料的用量试试。
2. 你PCR几个循环啊，加大循环数试试。
3. 你也可以直接拿PCR产物回收，用回收后的产物来做模板，继续PCR，这样特异性也会好一些。

hulu呼噜[使用道具]
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发表于 2014-10-26 22:15 资料个人空间短消息加为好友

小中大

还可以啊，不算很弱。你胶配的有问题，没溶解完全，染料多加点。

milkdog[使用道具]
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发表于 2014-10-26 22:15 资料个人空间短消息加为好友

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配胶的时候适当延长加热时间，增加PCR循环数，另外PCR产物直接跑胶，适当增加染料用量，拍胶图时适当调高光强度看看。

boom[使用道具]
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发表于 2014-10-26 22:15 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 standbyme 于 2014-10-26 22:14 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

1. 是不是你的胶染色不行啊，连marker都挺浅的，加大染料的用量试试。
2. 你PCR几个循环啊，加大循环数试试。
3. 你也可以直接拿PCR产物回收，用回收后的产物来做模板，继续PCR，这样特异性也会好一些。 ...

胶染色我延长了时间，但是mark亮了，条带还是不亮。pcr我都加到了40个循环，应该不少了吧。我现在主要的问题是：目标条带不亮，引物二聚体严重。我一共做了从54-59（引物TM一个是58，一个是59）度梯度pcr出来结果还是不行。好烦

boom[使用道具]
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发表于 2014-10-26 22:16 资料个人空间短消息加为好友

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QUOTE:

原帖由 milkdog 于 2014-10-26 22:15 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

配胶的时候适当延长加热时间，增加PCR循环数，另外PCR产物直接跑胶，适当增加染料用量，拍胶图时适当调高光强度看看。

我用的是丙烯酰胺做的，我的循环数40个，我也跑过42个，但效果也不好。

boom[使用道具]
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发表于 2014-10-26 22:16 资料个人空间短消息加为好友

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原帖由 hulu呼噜 于 2014-10-26 22:15 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

还可以啊，不算很弱。你胶配的有问题，没溶解完全，染料多加点。

已经很暗了，基本上看不到带。我用的是丙烯酰胺胶做的，以前跑这么大片段都很亮的。

boom[使用道具]
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发表于 2014-10-26 22:17 资料个人空间短消息加为好友

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