【求助】基因表达量低，但是想做荧光定量

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标题:【求助】基因表达量低，但是想做荧光定量

##蒙奇奇[使用道具]
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发表于 2014-10-26 22:25 资料个人空间短消息加为好友

小中大

设计的引物是跨内含子，但是荧光定量做出来效果很不好，咨询过一些公司的技术，说我的基因表达量低没法进行定量，但是如果不能做实验就要全改了，改不起啊，拜求指点。附上图了，求分析。

目的基因

附件

2014-10-26 22:25

SLC34A1.jpg (80.32 KB)

##蒙奇奇[使用道具]
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发表于 2014-10-26 22:26 资料个人空间短消息加为好友

小中大

内参

附件

2014-10-26 22:26

actin.jpg (80.63 KB)

wawa[使用道具]
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发表于 2014-10-26 22:26 资料个人空间短消息加为好友

小中大

目的产物不对啊，引物没设计好么？

mingming0638[使用道具]
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发表于 2014-10-26 22:26 资料个人空间短消息加为好友

小中大

目的基因的峰怎么有那么多？特异性不好吧，溶解温度也好高啊，是高GC的么？

u76mp[使用道具]
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发表于 2014-10-26 22:27 资料个人空间短消息加为好友

小中大

你把目的基因扩增的产物长度加长，理论上，目的基因PCR产物每增长2倍，相同的模板，Ct值会降低1！依次类推。但是这个时候你要对Ct值做一个换算。

viviwang1987[使用道具]
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发表于 2014-10-26 22:28 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 u76mp 于 2014-10-26 22:27 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

你把目的基因扩增的产物长度加长，理论上，目的基因PCR产物每增长2倍，相同的模板，Ct值会降低1！依次类推。但是这个时候你要对Ct值做一个换算。

可以一试

greenbee[使用道具]
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