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标题:【求助】转基因小鼠基因PCR鉴定，琼脂糖凝胶电泳没有条带

qumm1985[使用道具]
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发表于 2014-10-26 22:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】转基因小鼠基因PCR鉴定，琼脂糖凝胶电泳没有条带

老鼠是jackson买的，引物序列，反应程序都是上面给的，以前能P出来的，条带大概是700，                                                
但是现在的条带都是弥散在孔中的，我试过很多种裂解方法，蛋白酶k，AB液的都无效，引物也换了很多公司，mix也是，都是没有条带，各位高手能不能给点建议，谢谢大家了，小弟pcr菜鸟，求救！
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rxcc33[使用道具]
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发表于 2014-10-26 22:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
回忆下以前是怎么p出来的，调整下温度程序，换换pcr仪试试，各个步骤都排查一下。
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dreaming[使用道具]
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发表于 2014-10-26 22:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

这个情况我也遇到过，你可以换一种MIX试一下！有的MIX 不好，跑不出来条带的！
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dreaming[使用道具]
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发表于 2014-10-26 22:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

还有就是，凝胶的浓度考虑一下！
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ha111[使用道具]
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发表于 2014-10-26 22:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

可以提高下退火温度试试～
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wood533[使用道具]
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发表于 2014-10-26 22:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你的模板浓度会不会太高呢？模板浓度高了也会抑制PCR反应的。你稀释下模板试一试。
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wood533[使用道具]
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发表于 2014-10-26 22:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我赶脚是模板浓度高了，如果你再P不出来，可以联系我～～
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qumm1985[使用道具]
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发表于 2014-10-26 22:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 dreaming 于 2014-10-26 22:50 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

还有就是，凝胶的浓度考虑一下！

胶本来是用2%的，后来试过1.5%
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qumm1985[使用道具]
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发表于 2014-10-26 22:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 wood533 于 2014-10-26 22:50 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

你的模板浓度会不会太高呢？模板浓度高了也会抑制PCR反应的。你稀释下模板试一试。

一开始是6ul后来加过0.5ul的。都没出来过。
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ffooll[使用道具]
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发表于 2014-10-26 22:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

减少dntp的用量
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