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标题:【求助】空白也PCR出的两条带

天蝎座[使用道具]
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发表于 2014-10-27 17:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】空白也PCR出的两条带

你好，麻烦帮我分析下，为啥我的空白（以水做模板）pcr也p出了条带，可能是哪儿出来问题啊？图中从右到左以此为：含目的基因的质粒（公司全合成的基因）、pET28、水为模板的PCR产物、含目的基因的质粒为模板的PCR产物、pET28为模板的PCR产物、marker（从下往上100、200、300、400bp）、水为模板的PCR产物、含目的基因的质粒为模板的PCR产物、pET28为模板的PCR产物。P出来的条带为四百多bp，跟我的目的基因是吻合的，可是不知道为啥以水和pET28为模板也会p出条带，而且有两条。谢谢！


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2014-10-27 17:08
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any333[使用道具]
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发表于 2014-10-27 17:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

是超纯水么？？
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发表于 2014-10-27 17:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

有被污染！
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天蝎座[使用道具]
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发表于 2014-10-27 17:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 XYZQ 于 2014-10-27 17:10 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

有被污染！

应该是操作问题，我没有无菌操作，可是我又P了一次！pET还是p除了两条带，可能是为什么啊？谢谢！
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XYZQ[使用道具]
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发表于 2014-10-27 17:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

这次有无菌操作吗？建议都要无菌操作，还有枪管内可能有气溶胶污染，建议灭菌！一点拙见...
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发表于 2014-10-27 17:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 any333 于 2014-10-27 17:09 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

是超纯水么？？

用的双蒸水，应该是操作问题，我没有无菌操作，可是我又P了一次！pET还是p除了两条带，可能是为什么啊？谢谢！
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发表于 2014-10-27 17:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我们实验室以前也有，我并没有在超净台里操作而是采用新制灭菌超纯水（18.9MΩ）+进口新灭菌枪头+75%~80%酒精擦枪（里外都擦）+新灭doff管+新拆包96孔板+实验前酒精喷雾试验操作区域+全程手套操作。。。

之后阴性对照不出了~但是我发现过了2周左右如果不新灭枪头和各种小管子阴性对照就会再出现~可能和我们实验室周围正在施工有关系吧，外围环境不是太好。
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发表于 2014-10-27 17:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
水污染了
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发表于 2014-10-27 17:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

水污染， 或你的你两个引物配对碱基多，进行扩增了
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发表于 2014-10-27 17:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

最大可能就是水污染了。如果超纯水仪不定期换过滤芯，出来的水是不可靠的
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