【求助】透射电镜观察细胞形态

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标题:【求助】透射电镜观察细胞形态

哈密瓜[使用道具]
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发表于 2014-10-29 17:53 资料个人空间短消息加为好友

小中大

想利用透射电镜观察药物作用于贴壁细胞后，细胞的变化，因为专业是药化，对细胞方面了解较少，希望有经验的虫子能传授下操作，比如需要什么密度的细胞，细胞量要多少，用什么来培养细胞（6孔板、小皿、细胞培养瓶）及加多少细胞液，给药体积是多少呢，用什么固定好（用什么洗，固定多久好呢？），固定完怎么保存？固定之后的包埋、制片会有专门老师操作，主要就是固定及之前养细胞的一些操作细节，请大家帮帮忙吧

efp[使用道具]
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发表于 2014-10-29 17:54 资料个人空间短消息加为好友

小中大

6孔板就行，10^5个细胞/ml，每孔2ml，24h后加药，给药体积能少就少，看药物溶解度，能溶于水就用培养基配，不行就用DMSO溶解。液体药就直接加。药物作用时间看你实验需要，固定用戊二醛。最后每个样品收集10^6细胞

哈密瓜[使用道具]
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发表于 2014-10-29 17:55 资料个人空间短消息加为好友

小中大

【回复】

不好意思，那请问固定具体怎么做呢？是将细胞消化、离心后直接在离心管里加固定液吗？固定液浓度和时间怎么把握，固定后用PBS洗吗？还有最后每个样品收集的数量是固定前计数吗？因为实在不懂，问的问题太琐碎，麻烦您啦！

efp[使用道具]
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发表于 2014-10-29 17:55 资料个人空间短消息加为好友

小中大

恩，细胞收集了加固定液，2%的戊二醛，加完快点轻轻吹打，细胞散开，可以过夜固定，不用你洗，直接送过去，计数液没必要的。细胞别损失太多就行了