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标题:【求助】细胞消化完总是团块状

ukonptp[使用道具]
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发表于 2014-11-1 15:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】细胞消化完总是团块状


细胞消化完要做细胞计数，可是无论怎么吹打总是成团块状，不能计数 消化时间5分钟 细胞类型vero细胞 因为要铺板，计数 很是苦恼 请帮忙分析一下原因
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mingming0638[使用道具]
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发表于 2014-11-1 15:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

消化酶有没有问题？
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ladyhuahua[使用道具]
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发表于 2014-11-1 15:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
多洗一下,看酶的活性是不是受影响了
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iii_ii[使用道具]
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发表于 2014-11-1 15:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你是单独用胰酶还用TE啊 如果是单独用胰酶，那就换TE。如果用的就是TE，那么就要考虑你胰酶的活性问题了，胰酶的活性一定要有保证，一般配好分装，－20度保存，使用时解冻，4度保存不能超过一周
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zhy平平[使用道具]
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 小中大
成团块状说明你消化下来了，不知你的胰酶中有没有EDTA，建议最好加点
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boom[使用道具]
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发表于 2014-11-1 15:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
成团是一种正常的现象，按一个来记数
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mercedes[使用道具]
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发表于 2014-11-1 15:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

消化前先用冷PBS wash，除去serum，消化完后不要马上加media灭活，转移到 15ml 管里，吹打20下在加media
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vera+[使用道具]
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发表于 2014-11-1 15:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

吹打前培养瓶尽量轻拿清放,5分钟的消化时间过长了点,,动作稍微大,可能没到吹打,细胞成团下来了,影响后面吹打的效果了.也许是这样吧,跟大家商榷下
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33号[使用道具]
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发表于 2014-11-1 15:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我认为消化时间过长，我一般用2-3分钟，并且在吹打时应该从下到上一层层的吹
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woshi[使用道具]
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发表于 2014-11-1 15:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

消化后细胞结团，是消化时间长了有点太过
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