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标题:【求助】 293细胞为什么不贴壁

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发表于 2014-11-1 17:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】 293细胞为什么不贴壁

我是个新手，养的扩大生产用293细胞传代后都不贴壁，每次第二天看，贴壁的都极少，大量细胞都漂在上面，过两天看贴的更少，换液也没有用。养了四五天显微镜下也没看到污染现象。 应该不是血清和胰酶的问题。 请教各位怎么回事啊？ 谢谢
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kuohao17[使用道具]
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发表于 2014-11-1 17:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

可能原因：1 消化过度。2细胞本身生长状态不好。3 培养瓶如果是旧的处理不好，也可能不易贴壁。 解决方法：1 细胞如果贴壁不牢，不用消化，直接吹打传代即可。2 换新培养瓶。3 减少消化时间，或降低消化酶浓度。
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发表于 2014-11-1 17:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

很有可能是瓶子的问题，瓶子刷的不干净细胞是不会贴壁的，还有可能就是你的培养基营养成分不够。
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发表于 2014-11-1 17:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
谢谢！ 有没有可能是支原体污染呢？
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发表于 2014-11-1 17:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

293最好用小一号的培养瓶，普通瓶子不行，或者先用一次性的质量好的培养瓶培养几天试试，贴壁性能好一些
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chuntian1983[使用道具]
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发表于 2014-11-1 17:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
293细胞处理用的胰酶,PBS和培养基温度一定不能低，最好刚从37度水浴锅里拿出来的。 加PBS，换培养也要很小心，要缓慢地加，否则很容易漂起来。
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发表于 2014-11-1 17:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

可以用点明胶试试看！
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发表于 2014-11-1 17:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

293细胞本来就是半贴壁细胞，你必须用特殊处理的细胞培养耗材，有商品化的，也可自己处理，但自己处理效果差一些，而且十分繁琐，建议买商品化的细胞培养板和瓶。
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vvmmoy[使用道具]
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 小中大

1 暂时换用进口的瓶或培养板，这样还不行，就铺多聚赖氨酸 2 加培养液时先加少量，等大部分贴壁后再补加培养液
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轰轰[使用道具]
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 小中大

293T是半贴壁细胞，所以如果是消化过度~~~~~可以不用胰酶消化，冷的EDTA就可以，比较粗暴的用冷PBS也可以消化下来。在室温下293T是不贴壁的据说，所以换液之类的要小心，PBS之前一定要温育。实际上我们养熟了之后都不用换液，10cm dish 24h 就长满了直接传代了。
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