细胞世界 » 讨论区 » 经验共享 » 【求助】肝细胞培养求助

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 19  1/2 12››
 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴
打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:【求助】肝细胞培养求助

尘朵朵[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 114510
精华 0
积分 154
帖子 67
信誉分 100
可用分 1058
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-9-25
状态 离线
1

发表于 2014-11-3 17:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】肝细胞培养求助


各位兄长大家好，我最近要做一下鼠的原代肝细胞培养．实验室以前没有从事这方面工作的经验，遇到了许多的问题，期望大家能给小弟帮帮忙：

（１）培养基的选择．资料有各种方法，１６４０，MEM等同时加入了许多生长激素，如胰岛素，地塞米松等．

请问：用那种培养基较好？应添加何种激素？

（２）在肝细胞的获得上，文献主要为灌流法．但此法用胶原酶太费，老板得意思使用直接的酶消化法．

请问：直接的酶消化法为何没有被广泛采用？
顶部
shenkunjie[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 76942
精华 0
积分 712
帖子 1124
信誉分 100
可用分 6420
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-11
状态 离线
2

发表于 2014-11-3 17:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
感觉各种培养基好象差不多，可取原代细胞的细胞因子混合培养啊。直接酶消化的效率太低
顶部
pulala[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 107976
精华 0
积分 288
帖子 315
信誉分 100
可用分 2326
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-4-27
状态 离线
3

发表于 2014-11-3 17:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我们实验室都用DMEM,加入小牛血清,谷氨酰胺,双抗即可.直接取乳鼠肝脏,剪碎,胰酶消化,效果不错.
顶部
jujuba[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 79697
精华 0
积分 612
帖子 903
信誉分 100
可用分 5331
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-14
状态 离线
4

发表于 2014-11-3 17:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我们实验室都用灌注法，效果非常好，胶原酶用的很多吗，我不知道，因为我看他们都是配好一大瓶前灌注液，后灌注液，用的时候没有觉得很费啊。直接酶消化确实效率不高。呵呵，不会你们老板连点胶原酶都买不起吧。
顶部
1472583690[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 117804
精华 1
积分 277
帖子 230
信誉分 102
可用分 1936
专家分 10
阅读权限 255
注册 2013-12-7
状态 离线
5

发表于 2014-11-3 17:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

两步灌流法是经典且实用的方法，并不算费胶原酶啊。如果到了非省这点酶的程度就别做培养了。 培养基用William E比较好，加地塞米松、胰岛素、双抗、谷氨酰胺和胎牛血清。 培养板用胶原包被的。
顶部
尘朵朵[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 114510
精华 0
积分 154
帖子 67
信誉分 100
可用分 1058
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-9-25
状态 离线
6

发表于 2014-11-3 17:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

谢谢！ 小弟的另一个问题是如何纯化肝细胞 可一定要帮忙呀！
顶部
dragonkilly[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77754
精华 3
积分 596
帖子 699
信誉分 106
可用分 4371
专家分 30
阅读权限 255
注册 2011-11-21
状态 离线
7

发表于 2014-11-3 17:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

分离肝细胞，可用离心法
顶部
yjf1026[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 76421
精华 1
积分 497
帖子 670
信誉分 102
可用分 4116
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-11-5
状态 离线
8

发表于 2014-11-3 17:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

用Percoll来离心分离
顶部
yueban-1147[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 75776
精华 0
积分 692
帖子 1064
信誉分 100
可用分 6113
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-27
状态 离线
9

发表于 2014-11-3 17:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我用酶消化法做过，但培养的细胞类型好象不是肝细胞，很象是上皮和成纤维细胞，是不是需要纯化，用什么方法纯化？
顶部
ssonglikihi[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 108898
精华 1
积分 361
帖子 338
信誉分 102
可用分 2472
专家分 10
阅读权限 255
注册 2013-5-15
状态 离线
10

发表于 2014-11-3 17:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
呵呵： 我也在做肝细胞的原代培养 我选用的是原位灌流方法，细胞的纯化经我的不断摸索我发现控制离心力和离心时间就能够达到较好的效果。培养液文献上推荐用f12的比较多，但是我发现1640也不错。两者没有明显的差别。我现在在作确认我的肝细胞的工作，用的免疫组化。但是他的可行性如何我还不知道。
顶部
 19  1/2 12››