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标题:【求助】DAPI染色或者Hochest33342染色技术

柒7[使用道具]
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发表于 2014-11-4 14:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】DAPI染色或者Hochest33342染色技术


我正在做DAPI染色或者Hochest33342染色，目的是观察转然后Hela细胞的核和染色质的变化。哪位高手作过或有经验请赐教！ 我按程序操作后在显微镜下观察不到激发光，所以想知道什么样的显微镜可以满足这种要求。激发光：343nm,359nm,发射光:483nm, 461nm。
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发表于 2014-11-4 14:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

哪位高手最好能提供一套实用的实验操作程序，这个技术是我实验的关键，一直无法突破，真是为伊消得人憔悴，我知道做细胞凋亡的朋友可能会用到这一技术！ 我是按照细胞培养书上介绍的方法进行的，但在荧光显微镜下观察不到细胞和荧光。
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tuomu45[使用道具]
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发表于 2014-11-4 14:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我做得很多 1 Hoechst是不是用ddH2O配的，不要用，否则会发生沉淀 2 终浓度：5umol/L，一般配成100X，染色10-15min，对细胞无明显毒性，荧光非常强。 浓度不要配错了。DAPI也是一样的，荧光更强更稳定 3 Hoechst染色可以直接在dish中操作（活细胞），也可固定后，DAPI则需先固定
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发表于 2014-11-4 14:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
谢谢。

谢谢你，我将尝试着做。不知需要什么样特殊的显微镜来观察结果
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vera+[使用道具]
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发表于 2014-11-4 14:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

DAPI则需先固定 ？？？？ 我们用活细胞也可以染色的呀
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发表于 2014-11-4 14:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我做得很多 1 Hoechst是不是用ddH2O配的，不要用，否则会发生沉淀 2 终浓度：5umol/L，一般配成100X，染色10-15min，对细胞无明显毒性，荧光非常强。 浓度不要配错了。DAPI也是一样的，荧光更强更稳定 3 Hoechst染色可以直接在dish中操作（活细胞），也可固定后，DAPI则需先固定

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请问你们的Hoechst是用什么配的，容易溶解吗？我用PBS配，不溶解。
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发表于 2014-11-4 14:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

OLMPUS荧光显微镜，需配有相应光谱的激发滤片！
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any333[使用道具]
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发表于 2014-11-4 14:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
1 Hoechst是不是用ddH2O配的，不要用，否则会发生沉淀？？？？
我在实验中也发现有沉淀，那用何溶液来配制没有沉淀呢？
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leifengta[使用道具]
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发表于 2014-11-4 14:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

Hoeschst 用PBS配，浓度10uM,染色30秒即可观察
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bojitu[使用道具]
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发表于 2014-11-4 14:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 leifengta 于 2014-11-4 14:47 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

Hoeschst 用PBS配，浓度10uM,染色30秒即可观察

hoechst一定要用水配！用PBS会产生沉淀，尤其是高浓度时！
常用的store液为100X或1000X
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