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标题:【求助】原代肝细胞培养细胞不贴壁?

shanzhapia696[使用道具]
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发表于 2014-11-4 14:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】原代肝细胞培养细胞不贴壁?


做小鼠原代肝细胞培养的时候出现了细胞不贴壁(玻璃瓶)的情况,怎么也找不出原因,而且用胰酶消化后细胞量少,不知道哪位高手可以给我解答一下,万分感谢.
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cocacola[使用道具]
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发表于 2014-11-4 14:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

血清的质量，培养液的PH值，消化时间以及培养瓶等都会影响细胞的贴壁，你可以换塑料培养瓶或培养板试一下！
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idea2011[使用道具]
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发表于 2014-11-4 14:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
不贴壁主要原因第一是细胞活力差，第二是缺少促贴壁物质。消化分离结束后的细胞活力如何？不行换胶原酶。
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fangxiang[使用道具]
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发表于 2014-11-4 14:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

一般动物成体器官的细胞培养都比较困难，贴壁和增殖都很成问题，你可以用乳鼠的试试，一般贴壁性和活性要高。我没有做过肝细胞培养，我做胰岛细胞培养，发现成体的胰岛细胞根本不贴壁。 如果有条件最好买成熟的细胞系，培养方便，做原代很累人，而且好多时候还要看机会。 玻璃瓶最好用鼠尾胶原处理，可以增加贴壁性。
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fangxiang[使用道具]
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 小中大
补充两点非常重要。 1 原代培养胎牛血清含量一定要高，一般20%~30% 2 胰酶消化时间一定要控制好，胰酶消化时间长对细胞活性影响非常大。
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ritou1985[使用道具]
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发表于 2014-11-4 14:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我刚发了一个有关肝细胞培养的帖子，在里面转了一圈，就见到了你的帖子．
我的意见是： 　
（１）：肝细胞培养恐怕必需用胶原酶． 　
（２）：拨玻璃瓶一定要包被（poly lysin or 自制鼠尾胶原）
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hyuu[使用道具]
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发表于 2014-11-4 14:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

买胶原包被的培养板（200元左右） 用胶原或明胶自己包被省钱
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IAM007[使用道具]
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发表于 2014-11-4 14:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

换一次的培养板就省事了，可给您的工作节省很多时间！ 价格优惠何乐不为呢？节省时间您可以去做其他事情呀！这样您的工作不是轻松了高效率了吗！
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misswu61[使用道具]
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发表于 2014-11-4 14:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
用胶原酶 鼠尾胶原包被 换塑料培养瓶 加生长因子
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leifengta[使用道具]
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发表于 2014-11-4 14:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
有的资料上说胶原酶消化最好不要超过10分钟
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