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标题:【求助】细胞生长慢,急死人了

荷塘青蛙![使用道具]
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【求助】细胞生长慢,急死人了


最近做细胞培养特别不顺,以前培养的卵巢癌细胞全部污染,新复苏的细胞生长非常缓慢,请教各位高手有什么绝招帮我度过难关。
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pou[使用道具]
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新复苏的细胞需要传一两代后才能生长旺盛, 表急。
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junhun[使用道具]
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新复苏的细胞最好在72小时里不要跟换培养基,或传代。
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junhun[使用道具]
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QUOTE:
原帖由 junhun 于 2014-11-4 16:10 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
新复苏的细胞最好在72小时里不要跟换培养基,或传代。

不会巴,新复苏的细胞怎么会在72小时内不换培养基呢?要知道复苏细胞时要去除冻存时加入的DMSO艾。
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dragonkilly[使用道具]
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你那细胞是否感染了支原体?
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bgf5[使用道具]
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别急,慢慢来!

请问是什么细胞?新复苏的有多久了?具体有何表现(比如形态、镜下有没有其它的异物等)? 新复苏一般要等3-5天左右才能传代的,还有的要加其它的促长因子什么的。
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zzzz[使用道具]
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看来不同的lab 做细胞的习惯差异挺大的。
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wood533[使用道具]
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这与你冻存时的细胞量有关系,细胞量少了,生长自然就慢了。另外,在冻存和复苏的时候,细胞会有损伤,因此,刚刚复苏,长得慢是比较正常的。细胞复苏讲究一点:先将解冻后的细胞悬液加入培养瓶,然后慢慢加入含血清的新鲜培养基,让细胞逐渐适应渗透压的变化(当然,如果你的冻存液血清浓度与生长培养基血清浓度相等就不必考虑此操作步骤)。待细胞生长3~4小时贴壁后,及时更换培养基,除去DMSO,以防止它对细胞生长产生负的影响。
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3648755[使用道具]
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这与你冻存时的细胞量有关系,细胞量少了,生长自然就慢了。另外,在冻存和复苏的时候,细胞会有损伤,因此,刚刚复苏,长得慢是比较正常的。细胞复苏讲究一点:先将解冻后的细胞悬液加入培养瓶,然后慢慢加入含血清的新鲜培养基,让细胞逐渐适应渗透压的变化(当然,如果你的冻存液血清浓度与生长培养基血清浓度相等就不必考虑此操作步骤)。待细胞生长3~4小时贴壁后,及时更换培养基,除去DMSO,以防止它对细胞生长产生负的影响。

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同意,dmso对细胞的影响还是很大的 接种的密度不能低否则可能长不满
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nut6694[使用道具]
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试试以下方法: 1.换一下血清; 2.加一些丙酮酸钠; 3.继续传几代也可能会自动恢复生长速度。 若如还不行,考虑以下因素: 1.细胞老化; 2.支原体污染。
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