【求助】转瓶培养293细胞

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标题:【求助】转瓶培养293细胞

yhz1973[使用道具]
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发表于 2014-11-4 16:19 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我现在刚刚开始做293细胞的转瓶培养，在培养中出现了以下问题：细胞接种至转瓶后出现了成团现象，几乎没有什么细胞贴壁。
接种前细胞生长状态良好。用的转速是0.2rpm；我想请教大家，该如何来解决成团问题和贴壁问题呢？谢谢先。

shenkunjie[使用道具]
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发表于 2014-11-4 16:20 资料个人空间短消息加为好友

小中大

你做的有血清还是无血清的??无血清解决成团问题很困难的,好像没有文献报道怎么解决的吧

yhz1973[使用道具]
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发表于 2014-11-4 16:20 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我做的有血清的培养基，HyCLONE血清和GIBCO的DMEM培养基，细胞在接种前生长良好。
我还有两个问题与同事有点儿分歧，我想确定一下：
1.所买的BELLCO转瓶机没有二氧化碳接口，必须接二氧化碳才可以培养好HEK293细胞吗？我发现在仪器说明书上说明二氧化碳会腐蚀仪器，所以不接二氧化碳。
2.我们买的WASTON转瓶是塑料盖子，松开一点应该可以用来培养细胞；同事以前是用橡胶塞，在此问题上也有分歧，在大规模培养中，是哪个方法好一些呢？
3.培养HEK293细胞的培养基是否需要在添加碳酸氢钠时有所改动呢？（因为转瓶机上没有二氧化碳接口。）
能够查到的资料太少了，所以连基础的问题还没有搞清楚；谢谢楼上的朋友，我会将实验继续进行的情况及时发表并讨论得！

shenkunjie[使用道具]
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发表于 2014-11-4 16:20 资料个人空间短消息加为好友

小中大

转瓶不是放在培养箱中得么??你的是转瓶还是发酵罐那??如果就是转瓶放在培养箱中就可以了,培养的CO2浓度5%或10%,碳酸氢钠量也要与之相对,这个谷里我记得好像有介绍的.CO2-碳酸氢钠是作为缓冲体系的,控制pH=7.2-7.4de1对你的培养没有什么影响的,另外据我了解293结团好像和你上面说的三个原因一点关系都没有的.细胞结团与血清,二价阳离子,转速有关的,好像还有几个因素一下忘记了.最后你如果用血清培养,细胞肯定是结团的啊.这个很正常的,除非你是做非微载体细胞培养的,那个也是结团的,就是控制结团的大小,不让结团影响细胞正常的生长罢了.偶也是初学者,刚刚上手,说说一点看法,见笑见笑

yhz1973[使用道具]
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发表于 2014-11-4 16:21 资料个人空间短消息加为好友

小中大

1.转瓶机没有二氧化碳接口；
2.现在细胞贴壁比较好了，不过还是成团。
3.我配置的培养液没有问题。
4.我用NBS生物反应器做过细胞培养，效果很好；但是现在想用转瓶来培养上罐用的细胞。欢迎楼上的朋友给我发邮件等

shenkunjie[使用道具]
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发表于 2014-11-4 16:21 资料个人空间短消息加为好友

小中大

为什么转瓶机上要有二氧化碳接口？？转瓶机和转瓶不是都放在培养箱里面的么？？培养箱里控制二氧化碳的浓度5％就可以了那，可否拍几张照片上来看看到底是怎么样的情况。我觉得我和你做转瓶培养的手段好像不太一样，呵呵。不知道你做转瓶培养的目的是什么？？操作又是怎么做的？？
我加你好友了，希望多多交流，谢谢