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标题:【求助】柱子活化和测柱效

bhka[使用道具]
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发表于 2014-11-26 16:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】柱子活化和测柱效

小弟第一次做液相色谱，毕业实验，是新买的柱子，柱子型号是Hibar®150-4.6 HPLC column
问题1：新柱子是先活化还是先测柱效？怎么活化？怎么测柱效？
     注：柱子（测柱效）说明书：检测物质是（甲苯，蒽，臭樟脑）
                           Eluent:           Acetonitrile/Waters(75/25)
                           Flow Rate:       1.3ml/min
                           inj.Volume:      1ul
                           Detection:        UV 254nm
                           Cell Volume:     3.2ul
                           Temperature:   ambient
          但是上面没写时间，还有一定要用乙腈吗？不能用甲醇代替？
问题2：我的流动相是甲醇和0.0128mol/l乙酸二氢钠，使用前怎么过度？
注：我的想法是： 先用甲醇/水（70/30）做流动相，抽泵，purge，平衡，再停泵，换甲醇/0.0128mol/l磷酸二氢钠（70/30），再抽泵，purge，平衡，最后进样，这样可以吗？
问题3：怎么看出那个是所要检测物质，比如说我测的是己烯雌酚，用标准品检测，所出来的出峰图假设有3个峰，那个是己烯雌酚？
  
  
各位大哥大姐帮帮忙啊，谢谢了
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bgf5[使用道具]
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发表于 2014-11-26 16:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

1不需要活化，新柱可以按条件做下柱效，不过你有测柱效的溶液吗？
2直接上你的流动相，柱子用完后先用90:10的水甲醇溶液冲洗半小时再用纯甲醇冲洗半小时
可以不用purge的，purge只是加速一下清洗过程，省不了几分钟吧（purge也可以用来赶气泡）

3根据保留时间来判断
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bhka[使用道具]
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发表于 2014-11-26 16:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
好吧，第三个问题问得有点白痴了，还有是今天晚上问了下实验室的学姐，她是说新柱子不要测柱效，然后活化大约2小时，然后我想说的是过度直接包含在活化里，可以不 比如:实验仪器（waters 1525），先甲醇/水（5/95），抽泵，purge，平衡2小时，然后停泵，换甲醇/磷酸二氢钠，抽泵，purge，再平衡，然后可以测样，这样可以吗？
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发表于 2014-11-26 16:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
3. 用表样和样品峰的出峰时间来确定
如果还是不行，就在样品中加点表样进去，看看出峰情况
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yjf1026[使用道具]
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发表于 2014-11-26 16:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
液相柱子，基本不需要活化的，顶多是平衡，因为柱子保存的溶剂和你要用的流动相可能有一定的差距，一般平衡个十几分钟就OK了。柱效的话，个人觉得用之前最好测试下，避免柱子使用过程出了问题，与经销或者厂家沟通有不必要的麻烦。
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发表于 2014-11-26 16:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
测柱效还是很有必要的，主要是为了以后确定柱子是否需要再生或更新的依据。
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bhka[使用道具]
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发表于 2014-11-26 16:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
悲催啊，昨天第一天做，失败了，还好柱子没有进气泡
（第一次自己动手做感觉好困难，之前安排的时间表没有一项可以达到，最后是被膜给打败的，之前老师说混合纤维膜可以过有机相，谁知道甲醇一加上去就悲剧了）
昨天活化了下柱子，但是没有测柱效，关键是不知道怎么测柱效！！！
关键的关键点都没有回答啊
1 我那个过度的思路可行不？实验室老师强调一定要用水代替缓冲液过度啊。
2 如果我要条件优化的话，是不是每次改变条件前（比如流速，柱温。。。）都要平衡一次？
3 假如要换流动相是不是只要把流速调为0就可以不用停泵？就是让流速和压力降到0，稳定后就可以换流动相？
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XYZQ[使用道具]
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发表于 2014-11-26 16:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
新竹子不要活化的，不要接检测器冲冲就可以了
要是用盐，在盐前后用90%的甲醇—水过度
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