PCR仪 » 讨论区 » 经验共享 » 【求助】关于转基因外源基因拷贝数鉴定

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴
打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:【求助】关于转基因外源基因拷贝数鉴定

luoliqiong[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 108876
精华 1
积分 443
帖子 482
信誉分 102
可用分 3053
专家分 10
阅读权限 255
注册 2013-5-15
状态 离线
1

发表于 2014-11-29 08:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】关于转基因外源基因拷贝数鉴定

大家好，我想问一下，用相对定量检测转基因外源基因拷贝数的情况是，是否需要将内标准基因与目的基因共同狗见到一个载体上面？希望做过这块实验的高手告知实验技术路线，急求啊，谢谢。
转基因检测
顶部
gogo[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77052
精华 0
积分 821
帖子 1341
信誉分 100
可用分 7487
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-12
状态 离线
2

发表于 2014-11-29 08:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

做拷贝数是绝对定量。
不能用相对定量。
绝对定量是将你研究的基因构建到载体做标准品，然后你的样本与其进行一同分析得到你样本的拷贝数。
顶部
luoliqiong[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 108876
精华 1
积分 443
帖子 482
信誉分 102
可用分 3053
专家分 10
阅读权限 255
注册 2013-5-15
状态 离线
3

发表于 2014-11-29 08:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 gogo 于 2014-11-29 08:49 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

做拷贝数是绝对定量。
不能用相对定量。
绝对定量是将你研究的基因构建到载体做标准品，然后你的样本与其进行一同分析得到你样本的拷贝数。

有文献是做相对定量的，就是将内参和目的基因一起扩增  最后通过比值再计算出拷贝数。可是人家是用单拷贝的内参基因比较好做，想我做甘蔗的，基本没有单拷贝的内参基因，难啊
顶部
gogo[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77052
精华 0
积分 821
帖子 1341
信誉分 100
可用分 7487
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-12
状态 离线
4

发表于 2014-11-29 08:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 luoliqiong 于 2014-11-29 08:49 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

有文献是做相对定量的，就是将内参和目的基因一起扩增  最后通过比值再计算出拷贝数。可是人家是用单拷贝的内参基因比较好做，想我做甘蔗的，基本没有单拷贝的内参基因，难啊 ...

所以，你还是用绝对定量的比较好。不用考虑内参基因即可。
顶部
luoliqiong[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 108876
精华 1
积分 443
帖子 482
信誉分 102
可用分 3053
专家分 10
阅读权限 255
注册 2013-5-15
状态 离线
5

发表于 2014-11-29 08:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 gogo 于 2014-11-29 08:50 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')


所以，你还是用绝对定量的比较好。不用考虑内参基因即可。

但是我们就是要找出合适的内标准基因，通过相对定量的方法和绝对定量的方法验证实验结果的准确性，很坑爹，我到现在都不明白实验结果是要什么样的结果
顶部
89tongzijun[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 107993
精华 0
积分 331
帖子 342
信誉分 100
可用分 2546
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-4-27
状态 离线
6

发表于 2014-11-29 09:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 luoliqiong 于 2014-11-29 08:49 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

有文献是做相对定量的，就是将内参和目的基因一起扩增  最后通过比值再计算出拷贝数。可是人家是用单拷贝的内参基因比较好做，想我做甘蔗的，基本没有单拷贝的内参基因，难啊 ...

标准品的拷贝数怎么算呀？是不是有公式呀？
顶部
gogo[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77052
精华 0
积分 821
帖子 1341
信誉分 100
可用分 7487
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-12
状态 离线
7

发表于 2014-11-29 09:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
如果需要用单拷贝基因作为内参来做的话，那就选择样本本身的单拷贝基因作为内参就好了。
这种基因应该挺多的。
植物的好像有Pgk1和Acc1基因，应该还有其他的，你可以对你的那个物种进行检索一下。
顶部
TNT[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 75639
精华 0
积分 455
帖子 610
信誉分 100
可用分 3826
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-26
状态 离线
8

发表于 2014-11-29 09:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

内参的选择会涉及相对定量的准确性的，特别是低浓度样本
顶部