小中大 4.1 原理
本法主要是利用样品经过提取、皂化或者液一液分配以及柱层析净化，除去脂肪类物质、色素和多环芳烃以外的其他物质后，再通过液相色谱仪中的色谱柱，将苯并芘从多环芳烃物质中分离出来。求出样品中苯并芘的含量。
4.2 仪器
(1)液相色谱仪： 色谱柱：ODS柱，柱长250mm，Φ4mm;
柱温：30℃; 流动相：75%甲醇; 流速：2mL/min。
(2)检测器：荧光检测器，激发波长369nm，荧光波长405nm。
4.3 操 作 步 骤
(1)定性测定 用微量注射器吸取一定量的苯并芘标准溶液和样液，注入色谱仪内，根据苯并芘的出峰保留时间和样品中加标准样产生重叠情况进行定性。
(2)标准曲线的绘制 用微量注射器准确吸取每1mL含1μg的苯并芘标准溶液1、2、3、4、5uL按照上述实验条件进行操作，以获得相应的色谱图。然后，分别测量各个色谱的峰面积。以峰面积为纵坐标，标准苯并芘量为横坐标，绘制标准曲线。
(3)样品的测定在上述实验条件下，吸取一定量经过柱净化的样品提取液，注入液相色谱仪中进行分离、分析，测得峰面积，然后从标准曲线上查出相应于此面积的苯并芘含量。
4.4 结果计算
X=
式中：X—苯并芘含量，μg/g;
A—从标准曲线中查出相当于苯并此的标准量，μg;
m—样品的质量，g;
P—点样体积与样品浓缩体积的比值。
4.5 说明及注意事项
(1)本法所用试剂及配制方法、样品的提取、净化步骤参照荧光分光光第二篇食品理化检测技术度法。
(2)高效液相色谱分离多环芳烃的效果与洗脱液的比例、柱温和流速等有关，其最适宜的条件随仪器而异。
(3)本法灵敏度为0.1ng/g。
因其不溶于水，微溶于甲醇和乙腈，所以用其他有机溶剂如DMF稀释较好
