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标题:【求助】大家有何好招，解决293T细胞贴壁不牢的问题？

韩梅梅[使用道具]
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发表于 2014-12-4 15:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】大家有何好招，解决293T细胞贴壁不牢的问题？

本来分盘（12和24孔）好好的，分得很匀，但每回换液我再小心（非常缓的滴加溶液，PBS和培养液都提前室温放置好长时间等），换完液293T还是有不少漂起，弄得细胞分布很不匀，严重影响我的转染结果，比较郁闷，希望各位同仁给点意见，谢谢了！
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orangecake[使用道具]
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发表于 2014-12-4 15:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

用1ml枪头一滴一滴的缓慢滴入，当然滴下的地方仍然会有少量细胞漂起，但问题不大。
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nut6694[使用道具]
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发表于 2014-12-4 15:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
用1ml枪把培养基沿培养板的侧壁小心注入。
帖壁不牢的293T的特点，无法改变。（除非在培养基中加入一定量的Ca离子，但不知是否有不良影响）
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zwsyrt[使用道具]
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发表于 2014-12-4 15:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

用poly－lysine或明胶过一下，帮助贴壁
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kuohao17[使用道具]
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发表于 2014-12-4 15:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
这主要是还是细胞状态不好的原因，当然一些方法还是必要的。
建议每次换液不要吸的太彻底，留约200-500UL（而且对转染效率也有好处） ，整个换液过程还是要迅速点，但加入液体时一定要轻缓。
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leifengta[使用道具]
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发表于 2014-12-4 15:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

试着换一下缓冲液，或缩短清洗时间，还有血清质量是不是很好，如果用的是国产的，建议你使用进口的。
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韩梅梅[使用道具]
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发表于 2014-12-4 15:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 leifengta 于 2014-12-4 15:51 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

试着换一下缓冲液，或缩短清洗时间，还有血清质量是不是很好，如果用的是国产的，建议你使用进口的。

谢谢，“换一下缓冲液”你指的是PBS吗，换什么呢，还是pH变？血清用的都是国产，舍不得用进口的来养293
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