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标题:【求助】养细胞经常无缘无辜的染菌?

zbboom[使用道具]
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【求助】养细胞经常无缘无辜的染菌?

我是一个新手,但已养细胞近半年,最近一段时间经常染菌,有时是培养基,有时连原因都找不到,在实验中我也非常小心,但结果总让我伤心。现在都有点神经质了,请各位指点
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join[使用道具]
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你这个问题说大不大,说小也不小。说不大呢,七个字就可以回答你:严格按照无菌要求。说不小呢,这无菌要求的话匣子一打开太大。还是简要吧:1.将试验用品放入超净工作台用紫外线照射30分钟;2. 照射30分钟后,进入缓冲间,换灭菌的无菌衣,换专用拖鞋;3.手部用5%的洁尔灭浸泡2分钟,进入洁净区后,用75%的酒精棉球再次擦拭裸露的手部。4.最好戴口罩;5.操作时尽量靠近火焰;6.装培养基的瓶子等不要直接口向上,用一个架子斜放,瓶口朝向火焰;7.标准操作,不要让无菌吸管到处碰来碰去;8.中途出入无菌室,再次操作时,一定要再次用75%的酒精棉球消毒。 一下也想不了那么多,具体的你再问吧。最好把你怎么操作的过程描述一遍,我们就好针对性的指出错误了
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yhz1973[使用道具]
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建议你把细胞室,好好清理一下,污染是这样的,出现一次就比较麻烦, 千万别急。 ,还有,你们的紫外灯没有问题吧?
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zbboom[使用道具]
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非常感谢楼上的回信,在操作中我也严格按照无菌要求去做,因为操作台是公用的,而其它同学很少染菌,我想主要问题应在我身上,但是又找不到主要原因。我一般是这样操作的:紫外照后,用酒精棉檫拭手部开始操作,基本步骤是吸培养液到方瓶,再在方瓶中吹打混合,按比例传代,有时吸管头部碰在培养瓶口,有时吸管口棉花塞的太紧或太松不好用,有时原因都找不到,请各位指点。
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dream2013[使用道具]
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5
 

戴手套试试吧!
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和楼主一样痛苦啊!!! 刚调好状态准备铺板,又污染了!!!
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viviwang1987[使用道具]
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最好是涂片看看是什么菌?注意操作,吸管碰别处立即更换。污染是常有的事,也不必太给自己压力,熟能生巧。
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8
 
你的滴管吸管进培养液瓶和细胞培养瓶前要在酒精灯上仔细烤一下,滴管不要反复用。 其实无菌操作第一重要的就是你的超净台是不是还能用,滤网要及时清洗的。其次就是瓶口、滴管、移液器操作是过火的是否正确。 还有一点很重要,手一定不能在任何瓶口上方经过!
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wanglaoshi[使用道具]
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9
 
从你操作的步骤来看,你的细胞应该是很好操作的。没看到你要用消化液,这就减少了污染的机会。你用的吸管是自己做的吗?经常练练,熟能生巧,时间长了,你就知道如何控制所塞的棉花量了。(用牙签或12号针头等工具来塞比较方便,塞完后用火将露出的部分烧掉再灭菌,这样就不会在上吸耳球的过程中,出现将棉花弄掉的情况),另外,你要勤剪指甲,不要戴首饰,吸管一周灭一次菌,不要没用完老用。
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abc816[使用道具]
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10
 
操作是导致污染的最主要原因

根据本人的经验,操作是导致细菌污染的最主要原因。 本人以前曾经在一个相当严格的实验室工作过,那里的细胞室的要求是按照外科手术室要求的,更衣,换鞋,洗手,酒精擦手,戴口罩、帽子,所有培养液中加双抗,所有细胞操作器械专用;每天紫外灯照射40分钟后才允许进入。但是,就是这样的条件,操作不好,一样要污染。 现在本人工作的实验室要求比那个实验室差的天远地远,但是只要操作仔细了,一样可以把最难养的细胞养好。本人曾经参观过一些名人进行细胞操作,也就是换上拖鞋,连工作服都不换就进细胞室,细胞一样没有问题。所以,最主要的是:工作服,尤其是袖口,消毒情况如何,袖口是否能够扎紧。如果不能保证,不如索性把袖口挽起来,把手臂用酒精擦一遍(其实我本人连擦都懒得擦,一样没事)。操作时,滴管两头都要烧。还有一点很重要,就是滴管头在加液体的时候,不要深入瓶口太多。在倒培养液的时候,可以拿起培养瓶直接倒,但是注意要倒干净,瓶口沾的最后一滴液体千万不可回流倒瓶内。 还有一些基本的问题,比如瓶口要多烧一会,怀疑滴管有污染就一定要换。一旦细胞出现污染的迹象了,就一定要扔掉。如果实在想挽救,可以用一些高档抗生素(医院里给病人加药后的药瓶,用无菌盐水涮涮就能用,浓度足够),但要小心浓度太高细胞也会死亡。
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