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标题:【求助】RAW264.7细胞的培养问题

大大大山楂[使用道具]
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发表于 2014-12-4 17:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】RAW264.7细胞的培养问题

该细胞我用的是DMEM高糖培养基，10%FBS,1%P/S。培养情况不是很好，细胞膜向外生出很多角，希望培养过此细胞的人可以一起交流。另外，此细胞贴壁很紧，不知各位用胰酶消化几分钟？
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49888[使用道具]
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发表于 2014-12-4 17:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

RAW264.7细胞为小鼠单核巨噬细胞白血病细胞
培养基:1640+10%FBS
消化条件: 预冷PBS浸泡5－10Min
细胞正常形态为圆形,贴壁生长,生长速度较快,细胞难消化,消化时用预冷的PBS淋洗,然后浸泡5min,让后用枪轻轻吹起吹散收集离心,这个过程很关键,如果没有消化到位就吹打或消化过久,细胞次日贴壁就会分化,分化之后的形态是细胞两端长出尖尖的触角,细胞不再圆形贴壁,而是平铺向四周扩散生长。
所以你换培养基试试看，我养的挺好的！
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大大大山楂[使用道具]
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发表于 2014-12-4 17:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 49888 于 2014-12-4 17:27 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

RAW264.7细胞为小鼠单核巨噬细胞白血病细胞
培养基:1640+10%FBS
消化条件: 预冷PBS浸泡5－10Min
细胞正常形态为圆形,贴壁生长,生长速度较快,细胞难消化,消化时用预冷的PBS淋洗,然后浸泡5min,让后用枪轻轻吹起吹散收集 ...

呵呵。你好。我没有养过这个细胞但是我参照ATCC细胞库中的细胞形态，图我放在后面了，看到它低密度中也有很多有触角而不是圆形的细胞存在，我有点疑惑这个是不是你说的分化了的细胞？高密度看起来是圆形的。


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2014-12-4 17:27
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49888[使用道具]
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发表于 2014-12-4 17:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 大大大山楂 于 2014-12-4 17:27 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')



呵呵。你好。我没有养过这个细胞但是我参照ATCC细胞库中的细胞形态，图我放在后面了，看到它低密度中也有很多有触角而不是圆形的细胞存在，我有点疑惑这个是不是你说的分化了的细胞？高密度看起来是圆形的。 ...

是的
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发表于 2014-12-4 17:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

这种情况我们也遇到，所以传代处理要注意啦！
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zhenxin[使用道具]
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发表于 2014-12-4 17:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我也是用DMEM高糖的培养基，细胞也是养养就分化了，请问怎么好啊？望大家指教我一下！
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发表于 2014-12-4 17:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我刚刚买了RAW264.7，呈圆形，用10%FBS，高糖DMEM培养，一定要高密度传代，胰酶消化后，PBS清洗两遍，轻轻吹打就可以了
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发表于 2014-12-4 17:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

raw264.7好像transfer到10次以上就分化的越来越多~分化程度50%以上就最好别再用了
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发表于 2014-12-4 17:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我也养了这个细胞，但是形态看上去是这样的，就是贴避越来越不牢固了。
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 小中大

请问RAW264.7的大小
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