细胞世界 » 讨论区 » 经验共享 » 【讨论贴】逆转录病毒包装及转染

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴
打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:【讨论贴】逆转录病毒包装及转染

is2011[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 75851
精华 0
积分 510
帖子 680
信誉分 100
可用分 4233
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-28
状态 离线
1

发表于 2014-12-4 17:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【讨论贴】逆转录病毒包装及转染

请问哪位前辈做过逆转录病毒的包装及转染悬浮细胞的实验，有无宝贵的经验可以谈一下或者参考资料分享，多谢多谢！
顶部
koook5695[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 74058
精华 0
积分 408
帖子 475
信誉分 100
可用分 3256
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-4
状态 离线
2

发表于 2014-12-4 17:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你是说病毒和细胞悬液混合加入么？
顶部
whitesheep[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 78856
精华 0
积分 825
帖子 1330
信誉分 100
可用分 7476
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-4
状态 离线
3

发表于 2014-12-4 17:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我做过逆转录病毒的载体构建与包装。
但我想先知道你用的是啥载体（pMSCV,pMX或是其他），啥包装细胞（基于3T3的pt67，基于293T的AmphoPack），啥包装策略（瞬转包装，稳转包装）。
病毒的包装还是有难度的，得到高滴度的病毒颗粒并不容易。
顶部
is2011[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 75851
精华 0
积分 510
帖子 680
信誉分 100
可用分 4233
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-28
状态 离线
4

发表于 2014-12-4 17:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我的载体是PMSCV，打算用293T包，想通过稳转获得稳定表达株。
顶部
dragonkilly[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77754
精华 3
积分 596
帖子 699
信誉分 106
可用分 4371
专家分 30
阅读权限 255
注册 2011-11-21
状态 离线
5

发表于 2014-12-4 17:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
可以不筛，293的转染效率高，我做的达到了70%以上。我建议你构建一个将GFP插入MCS位点的载体，以作对照。试验时做两组细胞，带GFP的与你的目的载体同时转染。如果转染效率高，细胞亮的多的话可以在转染两天后收病毒颗粒攻毒。一般情况下病毒颗粒滴度不会太高，我建议你连续
三天每天收集病毒液攻毒。

我这有份资料不错，你看看吧，做病毒的话基础知识一定要过硬。

以后常交流。
顶部
dragonkilly[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77754
精华 3
积分 596
帖子 699
信誉分 106
可用分 4371
专家分 30
阅读权限 255
注册 2011-11-21
状态 离线
6

发表于 2014-12-4 17:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

cuturl('http://bbs.bbioo.com/thread-43754-1-1.html')
这个资料也可借鉴
顶部
bgf5[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 76186
精华 1
积分 430
帖子 435
信誉分 102
可用分 3111
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-11-2
状态 离线
7

发表于 2014-12-4 17:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我做过逆转录病毒的载体构建与包装。
但我想先知道你用的是啥载体（pMSCV,pMX或是其他），啥包装细胞（基于 ...

========================================================

你好，请问你是用的什么转染方法?脂质体吗？怎么达到那么高的转染效率？
顶部
gemei0115[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 76303
精华 0
积分 530
帖子 658
信誉分 101
可用分 4191
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-11-3
状态 离线
8

发表于 2014-12-4 17:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 bgf5 于 2014-12-4 17:33 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
我做过逆转录病毒的载体构建与包装。
但我想先知道你用的是啥载体（pMSCV,pMX或是其他），啥包装细胞（基于 ...

========================================================

你好，请问你是用的什么转染方法?脂质体吗？怎么达 ...

我现在转而做慢病毒了。
用pspax2、pmd2.g做包装载体，连同病毒骨架转染293t。


查看积分策略说明
附件
2014-12-4 17:34
攻毒.JPG (153.92 KB)
 
顶部