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标题:【求助】细胞表面有黑点点怎么解决

土豆potato[使用道具]
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【求助】细胞表面有黑点点怎么解决

换了好几批细胞了,都是一开始状态蛮好的,传了几代之后细胞表面就有黑点点,看起来很脏,不知道怎么办。
消化液用的是0.02%EDTA+0.25%胰酶,500微升消化,消化液不吸出来。师兄师姐也这样,但是他们的细胞并没有问题。也不知道我实验操作哪里有问题。有什么要特别注意的细节吗?很纳闷。附图


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qhyu[使用道具]
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血清用的是Hyclone的血清
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dragonkilly[使用道具]
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细胞生长速度怎么样?细胞里貌似有空泡,有点像支原体污染的样子。
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土豆potato[使用道具]
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细胞生长速度怎么样?细胞里貌似有空泡,有点像支原体污染的样子。

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长得还蛮快,一天半就能长满
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utt0989[使用道具]
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你养的是平滑肌细胞,还是293?
方案一:试一试换液的时候用用预热PBS冲洗一下,看行不行;
方案二:如果不行,估计就是Hyclone的血清的问题了,我们实验室哥们也遇到这种,比你的还严重,换了血清就没有了;
方案三:看看同一个孵箱其他同事的有没有,如果有,要警惕黑胶虫哟!去年我们实验室遇到这种,我养的原代全部慢慢死掉,其他传代的细胞能长但是提蛋白就总不出结果,这样就只有把孵箱里的东西全扔掉,84消毒液抹2次/天(注意保护眼睛,带厚湿口罩,不要中毒了!!),连续三天,在用酒精抹两次,就可以了,
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土豆potato[使用道具]
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原帖由 utt0989 于 2014-12-5 10:30 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

你养的是平滑肌细胞,还是293?
方案一:试一试换液的时候用用预热PBS冲洗一下,看行不行;
方案二:如果不行,估计就是Hyclone的血清的问题了,我们实验室哥们也遇到这种,比你的还严重,换了血清就没有了;
方案三:看看同一个孵箱其他同 ...

我看其他人说黑胶虫是在培养液里细胞间的,我遇到的这个是在细胞表面,应该不是黑胶虫吧,都这样两个月了,同一个温箱里的都没事,郁闷
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土豆potato[使用道具]
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QUOTE:
原帖由 utt0989 于 2014-12-5 10:30 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

你养的是平滑肌细胞,还是293?
方案一:试一试换液的时候用用预热PBS冲洗一下,看行不行;
方案二:如果不行,估计就是Hyclone的血清的问题了,我们实验室哥们也遇到这种,比你的还严重,换了血清就没有了;
方案三:看看同一个孵箱其他同 ...

养的心肌细胞H9C2,下次试试看预热的PBS洗
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glass[使用道具]
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QUOTE:
原帖由 土豆potato 于 2014-12-5 10:29 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
细胞生长速度怎么样?细胞里貌似有空泡,有点像支原体污染的样子。

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长得还蛮快,一天半就能长满

如果两个月了生长速度还可以那就不能断定是支原体。如果有条件的可以做个PCR验证下是否为支原体污染
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uuooii[使用道具]
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支原体污染,我也遇到过,可以用泰乐菌素等抗支原体药物处理,这种状态的细胞生长速度不受影响,刚消化传代时很少,过一两天随着细胞密度的提高,小黑点也越来越多,而且用Hank“s液或者PBS也洗不掉。建议把细胞间及培养箱彻底消毒清理,不然无法彻底解决的,而且会污染其他细胞
另外如果是传代细胞过于衰老也是这种情况
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october7[使用道具]
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有可能血清问题啊
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