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标题:【求助】感受态与质粒转化

yonger[使用道具]
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发表于 2014-12-6 10:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】感受态与质粒转化

最近做感受态与质粒转化的实验总是长不出菌来。所用的菌是DH-5α，先按步骤制出感受态，接着在4℃冰箱中放12-14小时，再进行质粒转化。所用的标准质粒是6p-1，转化后的菌液是涂布在含有氨苄的平板上，并且设置了阴性对照与阳性对照，但是无论是实验组还是对照组都长不出菌来。所用的CaCl2也是重新配过的。请问这个问题是出在哪？
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feima+[使用道具]
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发表于 2014-12-6 10:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

那就是感受态有问题，感受态为什么要放4°冰箱，不放-80°呢？
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rxcc33[使用道具]
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发表于 2014-12-6 10:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

感受态的制备有问题吧
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idea2011[使用道具]
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发表于 2014-12-6 10:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
受态的制备过程都要完全无菌，我们有次装CaCl2的瓶子灭后没盖紧，之后感受态也是有问题。
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any333[使用道具]
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发表于 2014-12-6 10:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你用是什么载体？抗性没用错吧？
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pulala[使用道具]
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发表于 2014-12-6 10:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

感受态放四度那么长时间还能用吗？？？
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dodoit[使用道具]
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发表于 2014-12-6 10:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
制备感受态是个细活，一般实验室都不自制啦！ 都买现成的，可以保证效率的！
还有感受态保存时放-80,！
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发表于 2014-12-6 10:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

制备感受态和转化就这点步骤的话那就步骤有问题啊，感受态细胞在4度防止时间在24小时内活性是会有一定的增加的，还有你转化过后就直接涂板应该是不行的，不是有一步是在预热的不含抗生素的培养基里37度摇培一小时左右后在收菌涂布的吧
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toy[使用道具]
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发表于 2014-12-6 10:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
感受态  我都是在4度放24小时再用，质粒转化效率应该很高的，这都很难说，一个小细节错误也许就败了。
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dodoit[使用道具]
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发表于 2014-12-6 10:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

检查一下氨苄的浓度，是不是太高，我的是50-100微克每毫升LB。
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