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标题:[未解决]求助，面积归一法，拖尾因子大，峰面变异系数大。

  [未解决]本主题悬赏 可用分 10  
huahuama97[使用道具]
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发表于 2010-12-1 11:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

求助，面积归一法，拖尾因子大，峰面变异系数大。

本人所做实验为一种大分子的病毒蛋白的纯度测定（面积归一法）。采用的分子排阻色谱柱，病毒蛋白浓度在10ug/ml左右，流动相为1mM PB，进样量50ul。 现在的问题是目的峰拖尾因子太大，2.3左右； 另外连续进针，样品的峰面积变异系数7%左右，不同天的变异系数更大。

本人新手，恳求各位有经验的大虾多多指教讨论，有可能是什么原因以及有什么办法能解决。
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  • miracle   2010-12-1 11:43  可用分  +2   欢迎新手发起话题交流！
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shark423[使用道具]
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发表于 2010-12-1 11:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
方法是自己建立的吗？进样量有没有使用满定量？
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huahuama97[使用道具]
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发表于 2010-12-1 14:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
方法为自己建立的新方法。 什么叫满定量？ 是指超过柱载或检测限吗？ 如果是的话那没有超的，因为体积也是我试过不同体积后确定下来的，有试过100ul，没有问题的。  自动进样器，刚做过检测，没问题。

[ 本帖最后由 huahuama97 于 2010-12-1 14:31 编辑 ]
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小莲[使用道具]
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发表于 2010-12-1 18:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #1 huahuama97 的帖子

重现性不好，极有可能是超载进样，试着减小浓度。
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huahuama97[使用道具]
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发表于 2010-12-3 18:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #4 小莲 的帖子

我样品浓度已经很低了 大约在10ug/ml左右 峰高才2.5mV 还需要再降低吗？
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wang_xing11[使用道具]
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发表于 2010-12-4 14:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
　　不是特别理解，但是提一些我的理解和建议：

　　1.流动相为1mM PB是什么?有点孤陋寡闻，呵呵。拖尾严重，是不是可以加缓冲盐来改善?

　　2. 你们仪器的系统适应性怎么样?做样前能先做系统适应性实验吗?
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huahuama97[使用道具]
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发表于 2010-12-4 21:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #6 wang_xing11 的帖子

1mM PB是浓度为1m mol/L的 磷酸盐缓冲液
仪器的系统适应性实验怎么做？
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shark423[使用道具]
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发表于 2010-12-5 14:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
把磷酸盐缓冲液的浓度提高到50m mol/L试试，仪器的系统适应性只要你的所要成分完全分离，分离度达到1.5以上，理论塔板数达到要求，一般3000-5000以上就行，系统适应性检测浓度一般选择较低浓度，你的峰高才2.5mV ，就用这个浓度就行了。
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