液相色谱

有没有试用氨基柱的同仁啊？最近我买了跟国产的氨基柱做糖，流动相为乙腈：水=65:35，各个组分保留时间老是不稳定，而且呈有规律的变化。变化规律为每一次进样都比前一次进样晚出峰0.5min左右。各位老大，谁能帮忙解释一下啊？

系统未稳定吧，一直重复下去看如何。

加了柱温箱没有，进样前平衡了多少时间？

以前都是平衡30min，出问题后曾经平衡过2h，但是问题依旧。我觉得流动相、柱温等因素也可以排除，加柱温箱，柱温是恒温，另外在同样条件下C18柱就没有这种问题呢。哎，很费解啊。

晚0.5min不算太夸张呢，如果你是在同一批次流动相的条件下每一针都比前一针晚0.5min我们可以考虑是柱子，HPLC或者其它的问题。

但是用氨基柱HPLC-RID/ELSD做糖，正相色谱柱是靠水将糖洗脱出来的，你每次配置的流动相不可能保持水都是你说的35%。我经常做水相在 25%-30%之间浮动，保留时间没一批次都是1-2min之间的不一致，但是没有关系只要保证我这一批次内所有样品都是出峰时间一致就可以了。另外，按照EC2002/657要求,对分析物质保留时间的飘逸可以在+/_2.5%范围浮动.

另外,按照你的叙述,平衡时间还是有点少,如果是HPLC-RID你至少要30min平衡参比池,30min平衡检测池,如果是HPLC-ELSD还可以30min.但是正相柱子不像反相柱子平衡快,寿命长的.

[ 本帖最后由 miracle 于 2010-12-5 14:45 编辑 ]

非常感谢您的赐教，您的叙述是在下受益匪浅。
我的情况正如您所说“在同一批次流动相的条件下每一针都比前一针晚0.5min我们可以考虑是柱子” 具体点说应该是“是同一个样品，同一瓶流动相每一针都比前一针晚0.5min，”比如一个物质我早上做的时候保留时间为25min，一直做下去，到下午的时候保留时间能到50min。另外我用的荧光检测器，就是把还原糖衍生化后再上HPLC，用荧光检测器检测（衍生物的稳定性应该没问题）。

梯度还是等度?按照您说的平衡时间如果购长的话,不会出现这种问题,如果您还需要衍生化的话,那是不是应该考虑溶解样品的溶剂和流动相,柱子三者之间的关系呢?
柱子是问题的主要原因,但是根本问题不一定是柱子可能是流动相,试剂和样品造成柱子的原因.

我是做麦芽糖。因为做的少。还没怎么发现。