【求助】哪位前辈帮我分析下这张电泳图？

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标题:【求助】哪位前辈帮我分析下这张电泳图？

33号[使用道具]
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发表于 2015-1-13 10:35 资料个人空间短消息加为好友

小中大

目的DNA片段是658kb,最右边marker可以跑出来，可是pcr完之后条带总是这样的。琼脂糖胶浓度是1%的，电压100V.刚开始做电泳实验，很多地方不懂，哪位大侠帮我分析下？做了几天老出现这种状况，不知道是哪里出问题了，很着急！！！！

[ 本帖最后由 33号于 2015-1-13 10:37 编辑 ]

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2015-1-13 10:35

1.jpg (36.7 KB)

leifengta[使用道具]
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发表于 2015-1-13 10:38 资料个人空间短消息加为好友

小中大

marker不是很清晰，可能和胶有关系，电泳相关的溶液都重新配了试试，PCR没见到有明显条带，暂时没法知道PCR是否成功，目的DNA片段是658bp吧？

toy[使用道具]
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发表于 2015-1-13 10:40 资料个人空间短消息加为好友

小中大

拖带很严重，建议减少PCR循环次数或者降低模板量。

nut6694[使用道具]
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发表于 2015-1-13 10:41 资料个人空间短消息加为好友

小中大

主要是PCR问题，建议把PCR条件引物Tm值等发上来让大家讨论。

33号[使用道具]
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发表于 2015-1-13 10:41 资料个人空间短消息加为好友

小中大

marker不是很清晰，可能和胶有关系，电泳相关的溶液都重新配了试试，PCR没见到有明显条带，暂时没法知道PC ...

===========================================================================================================

多谢。marker能跑出清晰的带来的，可能是我用的数码相机拍的照片，不太清楚，电解液什么的都是刚配的。嗯，是658bp，不小心写错了。线粒体上的一段，就是COI基因

33号[使用道具]
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发表于 2015-1-13 10:42 资料个人空间短消息加为好友

小中大

拖带很严重，建议减少PCR循环次数或者降低模板量。

=====================================================================================================

嗯，好的，多谢，我试试看。主要是之前一直用这个条件，可以做出来的。可是最近不知怎么回事，条带出来就是这种样子，拖尾很严重

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发表于 2015-1-13 10:42 资料个人空间短消息加为好友

小中大

主要是PCR问题，建议把PCR条件引物Tm值等发上来让大家讨论。

====================================================

先谢了。pcr使用的是50微升体系，Tm值是51°，目的片段是658bp。
ddH2O                25.5
dNTP                   8
MgCl2                5
Buffer(Mg free)    5
Templete             2
Primer1                2
Primer2                2
酶                   0.5
                        50

xiaoxiaoniao[使用道具]
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发表于 2015-1-13 10:43 资料个人空间短消息加为好友

小中大

拖带很严重，模板有没有降解呀？

33号[使用道具]
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发表于 2015-1-13 10:43 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 xiaoxiaoniao 于 2015-1-13 10:43 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

拖带很严重，模板有没有降解呀？

这个是提完DNA立马进行PCR的，之前也做过，无论是新提的还是之前提出来的，跑胶的时候都出现拖尾现象，我试了一下之前已经做出来的样品，也是这种现象，让人很郁闷。

ritou1985[使用道具]
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发表于 2015-1-13 10:44 资料个人空间短消息加为好友

小中大

你做多少个循环？我做了35个循环，也出现了和你一样的情况。后来师兄说可能是模板降解了，用新模板做，拖尾就减少了，要不你也试试

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