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标题:【求助】 PCR结果只有引物二聚体

lixi559[使用道具]
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发表于 2015-1-14 15:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】 PCR结果只有引物二聚体


以前p出来过的...
然后再p就p不出来了...只有很亮的引物二聚体
体系程序什么的都和之前一样...
重新提了模板还是不行，
体系是total   25ul
           Mix    12.5ul
           P1      1ul
           P2       1ul
           模板    2ul
           水        8.5ul

94 10min；94 1min ，55 1min ，72 90s，35个循环；72 5min

请问会是什么问题呢？
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1472583690[使用道具]
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发表于 2015-1-14 15:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
换个体系或者酶
一般我们最高就是20ul的体系
H2O：13.6、Buffer：2、Mg2+：2、P1/P2：0.4、dNTP：0.3、Taq：0.3、cDNA：1
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mingming0638[使用道具]
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发表于 2015-1-14 15:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

mix，引物等完全溶解了
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lixi559[使用道具]
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发表于 2015-1-14 15:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
用了两种酶都一样..不是越大体系的会越稳定？而且要割胶回收...20ul不够吧...这个应该不是关键的吧？
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lixi559[使用道具]
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发表于 2015-1-14 15:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 mingming0638 于 2015-1-14 15:17 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

mix，引物等完全溶解了

什么意思？是指等到引物和mix完全解冻？
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发表于 2015-1-14 15:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我们一般是50uL体系，质粒做模板的话不用加太多，只要质粒的质量够好，0.5uL和0.25uL我都成功过
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发表于 2015-1-14 15:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
10ul的我都做过回收（加甘油），效果挺好的，没听说过体系越大越稳定的最近有个一样做PCR的怎么做都没扩出来，改了体系就扩出来了，只是提供一个参考而已
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kuohao17[使用道具]
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发表于 2015-1-14 15:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
是啊，在冰上完全融化，要不然会成分不均匀，也有可能导致失败的
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rxcc33[使用道具]
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发表于 2015-1-14 15:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
对啊  。那你先不用mix做做啊。
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toy[使用道具]
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发表于 2015-1-14 15:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
er...做那么大体系p不出好浪费酶...-0-....
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