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标题:【求助】测序中断的原因

coolcool[使用道具]
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发表于 2015-1-14 16:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】测序中断的原因

急！pcr产物电泳条带单一也比较亮就直接送测序了，可是测序结果回来十分的郁闷，都在起始处很快就中断了，想求助下是否是因为连续的碱基造成了测序中断？如何解决？
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bgf5[使用道具]
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发表于 2015-1-14 16:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
可以做个逆向测序试一下，然后把两个方向的结果拼接起来
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coolcool[使用道具]
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发表于 2015-1-14 16:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #2 bgf5 的帖子

可是两段都有重复序列，两头都是在起始处就中断了。
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baidukk[使用道具]
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发表于 2015-1-14 16:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
那就从中间设计引物， 向两边测，然后拼接！
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dragonkilly[使用道具]
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发表于 2015-1-14 16:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

这种情况 我们都是做克隆的  基本上1K多 或者2K以内的片段都能搞定
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redbutterfly[使用道具]
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发表于 2015-1-14 16:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
先测反向试试
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发表于 2015-1-14 16:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
克隆后测序
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leifengta[使用道具]
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发表于 2015-1-14 16:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
是因为连续T的原因，可以克隆后，从两头测序，再拼接。运气好的话，可以一次把Poly T测通。
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00无名指00[使用道具]
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发表于 2015-1-14 16:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
浓度比较高，稀释到50ng/ul试试看吧
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nut6694[使用道具]
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发表于 2015-1-14 16:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

建议做T克隆后再测序，这样测序比较好些。
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