【求助】帮忙分析下PCR结果吧！

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标题:【求助】帮忙分析下PCR结果吧！

小螺号[使用道具]
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发表于 2015-1-14 16:51 资料个人空间短消息加为好友

小中大

大家好！这是我用菌落pcr产物跑的琼脂糖凝胶电泳图，恳请大家帮忙分析下出现这种情况的原因吧，谢谢！！

october7[使用道具]
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发表于 2015-1-14 16:51 资料个人空间短消息加为好友

小中大

都没有明显的条带出来，二号孔有一点。。不过算了吧。
首先，要做对照。检验体系是否有问题。
其次，有可能是菌落挑得太多，影响体系，回导致做不出来的。
最后，不知道你的引物有没有问题，一般没问题的

小螺号[使用道具]
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发表于 2015-1-14 16:51 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 october7 于 2015-1-14 16:51 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

都没有明显的条带出来，二号孔有一点。。不过算了吧。
首先，要做对照。检验体系是否有问题。
其次，有可能是菌落挑得太多，影响体系，回导致做不出来的。
最后，不知道你的引物有没有问题，一般没问题的 ...

对照是什么意思，是不是不加模版的对照，还是阳性对照？请不吝指教！

luoliqiong[使用道具]
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发表于 2015-1-14 16:51 资料个人空间短消息加为好友

小中大

你也把体系和程序附上来啊，这样咋分析O(∩_∩)O~菌液PCR不好做，可以提质粒再做啊

小螺号[使用道具]
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发表于 2015-1-14 16:52 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 luoliqiong 于 2015-1-14 16:51 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

你也把体系和程序附上来啊，这样咋分析O(∩_∩)O~菌液PCR不好做，可以提质粒再做啊

PCR 反应程序: 94 ℃× 5min
                  94 ℃× 1min -- 56 ℃×3 min--72℃× 3 min, n = 35 次
                  72℃× 10 min

PCR反应体系为25μl:
   PremMix 12.5μl
   上游引物       1μl
   下游引物       1μl
   模板             2μl
   水          补至25μl（8.5μl）
请指教，谢谢！

补充内容 (2012-7-17 15:50):
目的条带为1468bp

viviwang1987[使用道具]
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发表于 2015-1-14 16:52 资料个人空间短消息加为好友

小中大

从电泳条带来看，不知道你目的产物片段大约是多少，如果较大的话，那么最前面不到100bp的应该是引物二聚体，另外，可以把退火时间稍微缩短一下，模板加1ul试试看

viviwang1987[使用道具]
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发表于 2015-1-14 16:52 资料个人空间短消息加为好友

小中大

对照是什么意思，是不是不加模版的对照，还是阳性对照？请不吝指教！

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可以做出来的对照~前提是你配置PCR反应体系的时候，是一起配置的，最后分成几份，才加进去DNA。。。这样的话，在同一条件下，若对照可以做出来，其他做不出来就可以判断不是体系有问题了，可以判断为：菌加太多，或菌落根本没有这基因。
若对照也没做出来：可以判断体系出问题了~~即配置的溶液，你操作出问题等等或引物降解，或PCR参数出问题了~~所以做对照很好哟

tuomu45[使用道具]
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发表于 2015-1-14 16:53 资料个人空间短消息加为好友

小中大

PCR 反应程序: 94 ℃× 5min
94 ℃× 1min -- 56 ℃×3 min--72℃× 3 min, n = 35 ...

===============================

这个体系按照说明书，应该没问题的。。。

小螺号[使用道具]
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发表于 2015-1-14 16:53 资料个人空间短消息加为好友

小中大

PCR 反应程序: 94 ℃× 5min
94 ℃× 1min -- 56 ℃×3 min--72℃× 3 min, n = 35 ...

===============

目的条带为1468bp

小螺号[使用道具]
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发表于 2015-1-14 16:54 资料个人空间短消息加为好友

小中大

从电泳条带来看，不知道你目的产物片段大约是多少，如果较大的话，那么最前面不到100bp的应该是引物二聚体， ...

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目的条带为1468bp

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