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标题:【求助】本人欲浓缩蛋白，但不知该用何好的方法，...

hustwb[使用道具]
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发表于 2015-1-17 15:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】本人欲浓缩蛋白，但不知该用何好的方法，...

最近在做一个小分子蛋白的分离纯化，大小为5KD，过程是先从柱子上洗脱下来，后上制备液相分离，但是洗脱后体积太大！上液相的话，耗费乙腈太多，不合适，所以想要浓缩洗脱的体积，不知道该用何方法。蛋白在溶液中的浓度大约为20ug/ml，浓度不是太高。实验室里没有milipore的<5kd的超滤膜，所以超滤方法就不能用了，其他的比如硫酸铵沉淀或者是透析的方法，请各位高手指点一下，具体的做法！谢谢！
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555444[使用道具]
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发表于 2015-1-17 15:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
有冻干机的话，先透析后冻干。
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cbou876[使用道具]
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发表于 2015-1-17 15:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
首先看你分离得到的是否为纯品了，如果是，可以考虑冷冻干燥
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发表于 2015-1-17 15:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


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原帖由 cbou876 于 2015-1-17 15:08 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
首先看你分离得到的是否为纯品了，如果是，可以考虑冷冻干燥

不是纯品，我打算还要过一遍制备液相，这样子得到的才是很纯的，然后再冻干。但是要是上制备的话，样品的体积太多的，就会容易消耗乙腈（我用乙腈做B相）。所以打算把样品浓缩一下，就这个浓缩，大家觉得好的方法是什么？？？
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发表于 2015-1-17 15:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
有超滤膜是最方便的，离心也行
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发表于 2015-1-17 15:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
最方便的应该是超滤，可以高速离心
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发表于 2015-1-17 15:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


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原帖由 yychen 于 2015-1-17 15:20 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
最方便的应该是超滤，可以高速离心

超滤是好，可是我们实验室的膜没有<5kd的膜，就不能用了。有超滤的装置，没有相应的膜，巧妇难为无米之炊呢！ 透析的方法您知道怎么浓缩吗？ 具体的步骤。。。
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hustwb[使用道具]
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发表于 2015-1-17 15:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


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原帖由 555444 于 2015-1-17 15:07 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
有冻干机的话，先透析后冻干。

这个试过了，透析了，但是觉得盐分还是很多，冻干后有很多雪花似的晶体，而且容易飘散，冻干机底部飘落了好多，而且透析损失还是蛮大的。这个透析袋浓缩的方法您试过吗？？？具体步骤是怎么样的。。。谢谢！
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发表于 2015-1-17 15:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
首先看你分离得到的是否为纯品了，如果是，可以考虑冷冻干燥
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发表于 2015-1-17 15:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
不是纯品，我打算还要过一遍制备液相，这样子得到的才是很纯的，然后再冻干。但是要是上制备的话，样品的体积太多的，就会容易消耗乙腈（我用乙腈做B相）。所以打算把样品浓缩一下，就这个浓缩，大家觉得好的方法是 ...

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乙腈很容易浓缩，就普通旋蒸就可以。浓缩后，比较稠的情况下去真空干燥就可以，冷冻干燥不适于有机溶剂。
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