液相色谱

液相色谱反相柱（以C18柱为例）是否可以用纯水冲洗？我对这个事情很怀疑？

解释不能冲的人，说得还挺玄乎。
假如我是分析生物样品，流动相为含缓冲盐流动相，样品杂质中含有少量小蛋白，我走完样品应该怎么冲柱子？
请高手们回答下，把这个事情搞清楚。

要看色谱柱C18接的是什么键，不同的键对水的耐受性不同，有的柱子是不怕纯水做流动相的
含缓冲盐肯定先用10%甲醇水冲洗，含有蛋白如果是能耐纯水的色谱柱一般是用甲酸或者乙酸调PH大于2的水清洗

一般不能。
最多95%的水

这个也要看柱子了，柱子的耐受强度大，就可以。我记得做乳酸、富马酸、就是用纯水缓冲盐流动相做的吗？柱子也没有迅速的坏掉！

现在有适合全纯水的色谱柱，而且比较多，可以考虑下使用那种。一般性的如果长期用纯水，柱效下降比较厉害

您可否解释下为什么这种柱子适合纯水，一般性的不适合？
另外，我想明确一下：所谓的长期或长时间是指多长？
谢谢。

长时间用水冲洗色谱柱则可能引起固定相流失和柱塌陷现象，一般建议用5%的有机溶剂+95%的水冲洗，特别是用了缓冲盐的情况下。

请大侠具体解释下这个固定相流失和柱塌陷的原理。我不想知其然而不知其所以然。

反相色谱中固定相通常疏水性都很强,特别是长链烷烃高密度键合的情况下,疏水性更强。在高含水量的流动相环境下，固定相的疏水长碳链倾向于通过互相结合的方式尽量降低表面自由能，固定相的互相结合的结果使填料多孔结构的表面“失湿”，也就是不能很好被流动相润湿了。这个时候，在流动相中的极性待分析物就很难通过吸附扩散等作用接近固定相表面而发生相互作用，色谱保留能力就没有了，就是发生“相塌陷”了,也有人称之为“链折叠”或“固定相倒伏”。



图一所示：（a）是在甲醇水流动相下的碳链形状；（b）是100%水流动相下的碳链形状。

相塌陷会造成保留时间减少、保留时间没有重现性、拖尾程度增加以及梯度再生恢复时间变长等色谱性能变坏的问题。很多因素会影响保留时间减少的速率和程度，包括键合烷基链的类型、键合密度和硅胶孔径。当固定相的键合密度比较低的时候（小于3umol/m2），相塌陷不是个问题，因为残留在硅胶表面的硅醇基能使填料表面被水分子润湿，使烷基链有机会和极性待分析物中的疏水部位发生作用。当键合相是C3之类的短链烷基时，相塌陷也极少发生，因为短链烷基链的体积小，对亲水性的硅醇基的屏蔽作用不明显。

来自极限的解释

选用亲水性和极性很强的封尾试剂封尾

柱子选择合适的极性或亲水性的封尾试剂，可以使填料表面容易被水润湿，充分发挥长链烷基键合相的和分析物的保留作用能力。
市场上销售的采用这种工艺的商品色谱柱已很多，如热电的Aquasil C18，Alltech的Alltima AQ-C18，YMC的Hydrosphere C18，Waters的Polaris dC18等等。月旭公司的极限系列产品中，Ultimate AQ-C18也属于此类。各个厂家具体使用什么类型的极性封尾试剂和何种键合工艺，属于商业秘密，很少有资料提及，但普遍认为这些封尾试剂的封尾作用方式和传统的封尾试剂如三甲基氯硅烷类似。

来自-极限色谱柱

如果使用像市场上这种耐水色谱柱无时间限制。
一般性的色谱柱，如果连续使用一个星期，已经到了极限了。