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标题:【求助】求 电镜前处理过程

wood533[使用道具]
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发表于 2015-1-28 22:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】求 电镜前处理过程

我最近要做悬浮细胞扫描电镜，可操作人员不知道前处理过程，我只需要做好爬片就行，但问了许多细胞学老师，他们几乎不做这个，现求助知情者，谢谢～
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baidukk[使用道具]
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发表于 2015-1-28 22:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我也没有做过，爬片之后直接用盖玻片去做是没问题的，为了防止细胞变形，爬片后的的盖玻片应该做临界点干燥。如果来不及爬片，可以把细胞悬液滴在盖玻片上，空气干燥后去做，这样很快就能观察，但细胞会变形。
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wood533[使用道具]
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发表于 2015-1-28 22:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
爬好片的片子不是放在3%戊二醛里面4摄氏度保存吗？可不可以拿着浸在戊二醛的玻片去做电镜，处理的地方和做电镜的地方比较远
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baidukk[使用道具]
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发表于 2015-1-28 22:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
戊二醛固定后在4摄氏度中保存一年以内都可以做，固定后在室温条件下短时间放置也不影响效果，固定后的盖玻片不要重叠以免细胞脱落。
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wood533[使用道具]
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发表于 2015-1-28 22:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
还有个问题想请教一下，做细胞凋亡的荧光观察，如何才能做双激发？我用的是双染，但每次只能用一种波长的光激发，没有同一画面核、膜同时出现不同颜色荧光的现象，但我们需要双激发的效果
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baidukk[使用道具]
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发表于 2015-1-28 22:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
呵呵，我明白你的意思，但是很难做到。一般荧光的波长比激发光线的波长长一些，不同颜色的荧光染料要用不同的波长来激发，而荧光显微镜一次只能发出一种激发光线。你看到的资料中一个细胞被染成不同的颜色，那是用图像处理软件合成的。高级的显微镜像激光共聚焦显微镜都带有这种图像合成软件。
如果你所在的实验室没有图像处理仪，你可以分别原位拍摄蓝色、绿色或紫外激发的照片，然后在Adobe的图像处理软件PhotoShop中叠加成一幅照片。
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quiqui008[使用道具]
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发表于 2015-1-28 22:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
悬浮细胞的MTT法有人做过吗？我做的效果很不好
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