液相色谱

液相色谱，Agilent1200，用乙腈和磷酸盐缓冲液为流动相，检测波长260nm，各使用一个通道时，基线波动严重0.5mAU；先将流动相按比例混合后使用一个通道，则基线波动只有 0.01mAU。基线波动太严重，以至于我的实验不能开展。几个月前使用两个通道，相同的条件，并未出现此情况，基线波动也在 0.01mAU。我觉得应该是混合不匀造成的，但是仪器具体哪个部件出问题了呢？是比例阀吗？另外，室温的影响或者是磷酸盐缓冲液不干净、吸收太大，也可能是基线波动太大的原因。但以前同样温度低，使用一样的试剂配溶液，并未出现这种情况，所以我觉得可能性不大。之前比例阀出过漏液的问题，我修理过。在此，请教各位，这种情况是怎么回事呢？万分感谢！

很有可能是运行过程中产生气泡造成的，形成最有气泡的原因可能有：
1.脱气机可能有问题了，不脱气以致两相混合时产生了气泡，使基线不稳。
2.比例阀可能又出问题了，两相比例失调，产生气泡。
你可以看看从比例阀出来的管跑里有没有气泡产生，来判断是不是气泡造成的基线波动大

如果不走梯度的话，可以手动混合好后用单通道试试

我们实验室暑假就正好也出现了这个问题。
最后发现是气泡的问题。其实流动相都超时了点。但是混合后还是产生小气泡。不知道你们有没有配脱气机，我们是高压混合，但最后还是配了一个脱气机，成本很高

Agilent1200是先脱气后混合，我们的仪器是这样的，所以脱气后混合出现气泡是很有可能的啊！

我们也遇见过这种情况，建议不要拿纯的有机相和缓冲盐通过梯度混合，可以互相兑兑再混合，或者是先混成一体再做。两项的性质相差越大，混合后的噪声就越大。一般甲醇/水体系混混还行，换成乙腈就很容易出问题。我想应该是两相间的互溶性不太好引起的吧，而且现在气温低，溶解的就更差了。我们也是时好时坏，最后凡是这种都是先混好再进液相。

学习了，我们虽没出现这样的问题，但也了解了解

可以尝试下：先混合再用一个通道走流动相，如果还在摸索方法，就算了。
将乙腈和缓冲盐再超声等方法驱赶气泡，可能有一定的效果。
调节比率阀，并打开purge阀，观察是否有很多气泡，待气泡消失后，关闭排气阀，走基线。还有控制温度，温差大了，也容易有气泡，或基线不稳。

低压出现这个情况还可以说的过去，但是我们在没有脱气机情况下，高压泵后混合也出现了气泡。压力波动有2-3bar

暑假在脱气机未到之前，都是混合好，采用单一通道走，基线就没有出现过问题

我们以前也遇到过这种问题，换了一个比例阈就好了