细胞世界 » 讨论区 » 经验共享 » 【求助】请高手指点为何会频繁出现此种污染?

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴

标题:【求助】请高手指点为何会频繁出现此种污染?

00无名指00[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 76070
精华 0
积分 493
帖子 666
信誉分 100
可用分 4151
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-1
状态 离线
1
 

【求助】请高手指点为何会频繁出现此种污染?

最近刚开始进行细胞培养,我养的是前列腺癌PC3细胞,频频出现污染,每次污染发现的时候都是细胞形态已经基本上崩溃,散乱,然后在细胞之间发现细沙样的黑点,在低倍显微镜下显示非常小,从外观上看培养基比较浑浊,由于是菜鸟,就怀疑是操作原因,另外准备了六孔板将胰酶,血清,培养基,配好的完全培养基全部培养,最后发现是血清和配好的完全培养基出问题,在其中发现了絮状的黑团,扔掉重配后,前两天使用新培养基第一次传代,一传四,结果四瓶全部杯具。。。依然是从外观上看培养基非常浑浊,细胞中间出现细沙样的黑点。和之前的污染很类似,怕还是自己的操作出问题,于是在昨天请上一届师姐在一旁指点着做完了一次传代,中间有不对的请她即使指出,但是昨天发现依然出现这种类似的污染,请教各位,可能原因是出在哪?


查看积分策略说明
附件
2015-1-29 15:49
15490087.snap.jpg (28.79 KB)
 
顶部
00无名指00[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 76070
精华 0
积分 493
帖子 666
信誉分 100
可用分 4151
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-1
状态 离线
2
 
这是在倒置显微镜下的照片。  请各位不吝赐教,到目前为止,还处在养细胞练手阶段,但是每次传代必污染,没有一次不出现污染,实在是太打击人,找不出是操作的环节没有做到无菌还是培养液或使用器械受污染。
PS:目前每次操作的时间比较长,一次传代一传三,大约要1个多小时,这是不是很严重的一个因素呢?


查看积分策略说明
附件
2015-1-29 15:49
39618632.snap.jpg (32.43 KB)
 
顶部
superboy[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 77763
精华 1
积分 352
帖子 280
信誉分 102
可用分 2331
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-11-21
状态 离线
3
 

白色念珠菌?
顶部
kewanqi2011[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 76114
精华 2
积分 534
帖子 660
信誉分 104
可用分 4146
专家分 20
阅读权限 255
注册 2011-11-1
状态 离线
4
 
可能是霉形体污染吧。有没有可能你的细胞株就是污染的?
顶部
66小飞侠[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 75376
精华 0
积分 466
帖子 651
信誉分 100
可用分 4008
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-22
状态 离线
5
 
应该是细胞一开始保种的就是污染了的
顶部
xueyouzhang[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 76770
精华 0
积分 470
帖子 640
信誉分 100
可用分 3996
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-9
状态 离线
6
 


QUOTE:
原帖由 kewanqi2011 于 2015-1-29 15:52 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
可能是霉形体污染吧。有没有可能你的细胞株就是污染的?

我用的细胞株基本上是其他人传代时候传给我的,或者直接拿着其他人冻存的复苏的,但是其他人传代的同一批是不污染的,其他人冻存的复苏也是不污染的。请问如果是自己个人操作问题,那么最大的错误可能性会错在什么步骤呢?
顶部
xueyouzhang[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 76770
精华 0
积分 470
帖子 640
信誉分 100
可用分 3996
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-9
状态 离线
7
 


QUOTE:
原帖由 superboy 于 2015-1-29 15:52 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

白色念珠菌?

原来怀疑是黑胶虫,但是听上一届人说黑胶虫污染的不会出现培养基浑浊,而我的每次污染都浑浊,请问如果是白色念珠菌污染,会表现为什么情况?一般是什么原因导致的呢?
顶部
xueyouzhang[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 76770
精华 0
积分 470
帖子 640
信誉分 100
可用分 3996
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-9
状态 离线
8
 


QUOTE:
原帖由 66小飞侠 于 2015-1-29 15:52 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
应该是细胞一开始保种的就是污染了的

我用的细胞株基本上是其他人传代时候传给我的,或者直接拿着其他人冻存的复苏的,但是其他人传代的同一批是不污染的,其他人冻存的复苏也是不污染的。请问如果是自己个人操作问题,那么最大的错误可能性会错在什么步骤呢?
顶部
考拉乌拉拉[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 76538
精华 0
积分 151
帖子 62
信誉分 100
可用分 1021
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-7
状态 离线
9
 


QUOTE:
原帖由 xueyouzhang 于 2015-1-29 15:53 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

我用的细胞株基本上是其他人传代时候传给我的,或者直接拿着其他人冻存的复苏的,但是其他人传代的同一批是不污染的,其他人冻存的复苏也是不污染的。请问如果是自己个人操作问题,那么最大的错误可能性会错在什么步骤呢? ...

嗯,那真的是环境脏了么?建议趁过年有时间,把细胞间彻底用甲醛熏蒸一下,所有的枪,用的瓶子什么都换了吧,其他也没有什么办法了。。。
ps:黑胶虫污染?只有国内才有人说这个东东。国外的文献有提到过这种东西么?
顶部
xingyi08[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 76899
精华 0
积分 496
帖子 671
信誉分 100
可用分 4201
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-10
状态 离线
10
 
一般污染了,找不到原因的话, 真个细胞培养环境最好都做清洁,包括培养箱什么的,里面的硫酸铜也可以换一下,超净台里头用酒精好好擦一下,紫外过夜
顶部