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标题:【求助】 磷酸钙转染细胞，用甘油休克的目的是什么？

ququer787[使用道具]
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发表于 2015-1-29 16:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】 磷酸钙转染细胞，用甘油休克的目的是什么？

钙转细胞一直有几点不明白
1.这里的休克是什么意思？原理是什么？
2.转染之后，应该先用PBS洗，还是先休克？
3.转然之后第二天，总是看到黄黄的一层物质附着在细胞表面，是不是没洗干净的原因？
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orangecake[使用道具]
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发表于 2015-1-29 16:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

首先，钙转之前需要抑制溶酶体功能，防止你的质粒被降解，其次 改善细胞功能使颗粒更容易进入细胞。甘油或者DMSO shock无非就是增加进入细胞的质粒量。但是我并没有看到关于以上所说两种方法的比较。由于我只采用过先加氯喹然后钙转染的方法，所以你的第三个问题我无法回答。第二个应该是转染后培养三四个小时，换成10%甘油的PBS培养1分钟，然后再换成培养基。
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koook5695[使用道具]
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发表于 2015-1-29 16:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
首先，钙转之前需要抑制溶酶体功能，防止你的质粒被降解，其次 改善细胞功能使颗粒更容易进入细胞。甘油或者 ...

======================

请问如何抑制溶酶体的功能？
加氯喹的目的是什么？
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dior[使用道具]
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 小中大


QUOTE:
原帖由 koook5695 于 2015-1-29 16:07 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
首先，钙转之前需要抑制溶酶体功能，防止你的质粒被降解，其次 改善细胞功能使颗粒更容易进入细胞。甘油或者 ...

======================

请问如何抑制溶酶体的功能？
加氯喹的目的是什么？ ...

就是为了抑制溶酶体功能
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发表于 2015-1-29 16:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


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原帖由 dior 于 2015-1-29 16:07 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

就是为了抑制溶酶体功能

噢，谢谢你，还有一个问题，甘油或者DMSO如何增加质粒的进入量，原理是什么？
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IAM007[使用道具]
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发表于 2015-1-29 16:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
转染试剂  不可以做嘛
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发表于 2015-1-29 16:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


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原帖由 IAM007 于 2015-1-29 16:09 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
转染试剂  不可以做嘛

干扰膜功能，在具体我也不知道了。
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pou[使用道具]
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发表于 2015-1-29 16:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


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原帖由 IAM007 于 2015-1-29 16:09 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
转染试剂  不可以做嘛

脂质体转染对细胞的毒性很大，最近有篇文章说具有off-target的效应，如果做形态学观察，就不太合适。
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utt0989[使用道具]
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发表于 2015-1-29 16:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


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原帖由 pou 于 2015-1-29 16:10 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

脂质体转染对细胞的毒性很大，最近有篇文章说具有off-target的效应，如果做形态学观察，就不太合适。

哦    我们做的还可以    polifect
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