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标题:【求助】293细胞活力低的原因？有图有真像！

yjf1026[使用道具]
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发表于 2015-1-29 16:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】293细胞活力低的原因？有图有真像！

最近买了一株HEK293,培养时，有时看着很好，成梭状，一个个（右图）；有时看着不好看，成块状，好多细胞连一块的感觉，而且碎片黑点很多（左图）。查了ATCC的图片，也是成片的（和左图差不多）。然后，不管哪种形态，用胎盘蓝检测活性，总是只有50-60%的活力。感觉细胞碎片很多，是不是机器在计算细胞活力时，把碎片当成细胞来算，算是死的细胞。这个细胞贴壁效果差，我传代时，都是直接吹下的，没有使用胰蛋白酶，之前用过胰蛋白酶消化，嫌麻烦，现在一直都是直接吹下，直接吹下和胰蛋白酶消化有没有差别。最近，在做puro稳定筛选脂质体转染的293，老是失败。


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发表于 2015-1-29 16:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
最好是用胰酶消化后再加完全培养基吹开吧，机械的吹力对细胞伤害比较大，并且必要时需要离心去除一些细胞碎片，不要嫌麻烦了。细胞状态差时很容易出现黑点，并且长出的丝特别少。上面的图感觉像是传代是细胞密度比较稀呢，还是你的细胞死掉了？
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发表于 2015-1-29 16:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
同意楼上的看法！我经常养293T，细胞状态还可以，包病毒什么的基本没有问题！我是用0.05%的胰酶消化，大概需要10秒，时间视具体情况而定，然后轻轻吹打，尽量使细胞成单个状态。
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youreyes[使用道具]
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发表于 2015-1-29 16:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
右图的细胞已经死了，因素很多。消化时要用消化液的，不能直接吹下。楼上说得对！
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49888[使用道具]
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发表于 2015-1-29 16:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
细胞状态好，直接吹是很难吹下来的，用胰酶消化很好的。成块就是因为没吹散，铺的不均匀。细胞状态不好，原因很多，我觉得可能你吹得劲大了吧，再加上新买的，细胞还得适应新环境，另外培养基是什么品牌和型号？
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发表于 2015-1-29 16:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

细胞很稀时更换完全培养基   2-3天一换  不要动直到长好为止
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jiushikeshui371[使用道具]
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发表于 2015-1-29 16:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
新手，不知道怎么发帖，我想问下大家，高表达APP/PS1的细胞有哪些。HEK293 算不算
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yjf1026[使用道具]
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发表于 2015-1-29 16:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 49888 于 2015-1-29 16:15 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
细胞状态好，直接吹是很难吹下来的，用胰酶消化很好的。成块就是因为没吹散，铺的不均匀。细胞状态不好，原因很多，我觉得可能你吹得劲大了吧，再加上新买的，细胞还得适应新环境，另外培养基是什么品牌和型号？
...

培养基是hyclone MEM，血清是hyclone新西兰胎牛血清，血清含量10%。我的这个细胞，有时长的很好，但是不管长的好与不好，只要用培养基或者PBS，轻轻一吹就掉。这也是有次我加胰蛋白酶时，直接将胰蛋白酶用移液管打进去，刚好打到细胞平面上了，我发现平面上的细胞一片被全部吹下了，自此，我决定不用胰蛋白酶了。
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yjf1026[使用道具]
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发表于 2015-1-29 16:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 jiushikeshui371 于 2015-1-29 16:16 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
新手，不知道怎么发帖，我想问下大家，高表达APP/PS1的细胞有哪些。HEK293 算不算

APP/PS1是什么？
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standbyme[使用道具]
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发表于 2015-1-29 16:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
用胰酶吧，倒入后30秒后直接弃去胰酶，在显微镜下观察，等到细胞成圆形时，用手一拍，就可以看到细胞成片掉下，此时细胞不仅分散，而且活力很好。关键在掌握消化时间。血清可以从多到少得驯化
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