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维生素A的测定——紫外分光光度法

关键词：有证标准物质  国家环境标准物质  无烟煤标样  美国标准品
1．原理
维生素A的异丙醇溶液在325 nm波长下有最大吸收峰，其吸光度与维生素A的含量成正比。
本法的灵敏度较比色法高，可测定维生素A含量低于5µg／g的样品。主要缺点是在维生素A最大吸收波长325 nm附近许多其他化合物也有吸收，干扰测定，故本法适用于透明鱼油，维生素A的浓缩物等纯度较高的样品。对于一般样品，测定前必须先将脂肪抽提出来进行皂化，萃取其不皂化部分，再经柱层析除去干扰物。
2．仪器
紫外分光光度计。
3．试剂
①异丙醇。
②维生素A标准溶液：称取1 g相当于50 000国际单位维生素A的浓鱼肝油0．1000 g，加异丙醇溶解，定容至125 mL。此溶液1 mL相当于40国际单位(即40 IU．mL-1)。
4.测定步骤
①标准曲线绘制：分别取维生素A标准溶液(40 IU·mL-1)O．5、1．0、1．5、2．0、2．5、3．0、4·0 mL，于10 mL棕色容量瓶中，用异丙醇定容。以空白液调仪器零点，于紫外分光光度计上在325 nm波长下分别测定吸光度，绘制标准曲线。
②样品测定：称取适量样品，按照三氯化锑比色法进行皂化、提取、洗涤、浓缩、蒸发醚层后，迅速用异丙醇溶解并移人50 mL容量瓶中，用异丙醇定容，于紫外分光光度计325nm处测定其吸光度，从标准曲线上查出相当的维生素A含量。
5．计算
X=[(c*V)/m]*100
式中：X——样品维生素A的含量，IU·(100 g) -1；
   c——由标准曲线查得的维生素A含量，IU·mL-1；    ．
   V——样品的异丙醇溶液体积，mL；
   m——样品质量，g。