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标题:【求助】PCR的阳性对照，阴性对照，空白对照的...

wzqzy[使用道具]
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发表于 2015-2-13 14:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】PCR的阳性对照，阴性对照，空白对照的...


开始做pcr了，关于它的对照组。分子克隆上提到阳性对照有二组，阴性对照有二组，但是在网上又有说用水来做阴性对照。

有没有 一个确定的结论，比如说这几种对照中， 到底是模板，还是引物被换了？
能不能请各位大侠给小妹解释说明下？

多谢啦一。。。。。。
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发表于 2015-2-13 14:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

偶平时做的实验，阴阳对照只考虑模板，从未考虑过引物~
阳性对照：找个原来P出来的模板~这用来排除体系问题
阴性对照：模板换水~排除引物问题
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wzqzy[使用道具]
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发表于 2015-2-13 14:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

是不是P一个内参出来，和阳性对照是两码事？是不是要同时P个内参，再P个阳性对照？
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发表于 2015-2-13 14:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

阳性对照就是加入你以前能克隆的得到条带的引物和模板，这样你就能知道你的体系是可以扩出来东西的。而阴性对照就不一样了，你可以不加引物，不加模板，或者不加其他体系中的东东，老看看你的体系有没有污染，或者来检测你的体系中哪一个东东污染了。这和内参是不一样的，不是一个概念。内参一般是来做对照组，排除干扰的，或者是别的用途。阴性对照如果用水来做的话，别的东西都不加，这样没有意义。你的意思如果是体系中更没有模板，而只有水和其他pcr体系中的东东，那么就可以检测你的体系终是否存在其他的模板，可以检测你的体系污染与否，但是这是一个综合的指标。我们一般做的阴性对照就是只加水，不加模板。
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发表于 2015-2-13 14:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

大家好，我最近也是碰到这样的问题。我把目的片段连T载后，小提质粒测序没问题，于是双切，也切开了，接着再连目的载体，转化做菌液PCR挑的6个克隆都是阳性克隆，于是送了一个克隆去测序，结果序列完全不对····
不知道各位高人怎么看啊？  是继续送其他几个克隆测序还是重新双切再连啊？
还有个问题就是在测序、双切都有保证的情况下，连目的载体，得到的阳性克隆怎么会有假阳性呢？
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发表于 2015-2-13 14:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

RT 不需要对照吧 搞个maker 举行了 好好看文献把MicroRNA-206 Delays ALS Progression and Promotes Regeneration of Neuromuscular Synapses in Mice. 2009
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发表于 2015-2-13 14:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我觉得rt还是需要阳性对照的，只是用什么做阳性对照就不得而知了！！
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发表于 2015-2-13 14:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
那是说 在开始做pcr的时候没有标准的模板的话就可以不做阳性对照 是吗？
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发表于 2015-2-13 14:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
阳性对照可以是你的基因组，阴性对照就是水就可以了，一般就是两个对照就足以说明问题
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