【求助】 H9C2心肌细胞培养问题

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标题:【求助】 H9C2心肌细胞培养问题

木槿[使用道具]
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发表于 2015-2-23 23:47 资料个人空间短消息加为好友

小中大

各位前辈：
我养的H9C2细胞出现了些问题，请大家指点。
将H9C2细胞复苏后放入10cm培养皿中培养，24小时后观察贴壁的细胞特别少，于是换液，将悬浮的细胞吸掉，换成新鲜的培养液。之后又养了两天，之后观察，培养皿的中央细胞长的很少，周围长的很多，都是长梭形的。觉得细胞长的不是很均匀，我就把细胞吹下来放到两个6cm的培养皿中养。不知道为什么细胞长的特别不好。状态很差，贴壁长的也不是很多，而且出现了好多黑点，不知道是什么东西。请问各位前辈知道是哪里出错了吗？可以将养这个细胞的详细过程告诉我吗？因为我现在只有两管细胞了。

nn255[使用道具]
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发表于 2015-2-23 23:47 资料个人空间短消息加为好友

小中大

你加抗体了吗？细胞是不是染菌了！

uaubc[使用道具]
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发表于 2015-2-23 23:48 资料个人空间短消息加为好友

小中大

其实，我觉得问题不大啊，你只要再重新试一次就好了，我想应该不会出问题的。
你复苏的时候最好是接种到75cm2的大培养瓶中，1ml 冻存的细胞，加10-15ml （15ml会好些）的培养液，这样会好很多的，接种后摇匀，这样就不会出现一边多一边少的问题了。24h左右，看细胞的贴壁情况如何，在考虑换液。
我在实验室都是这样做的，感觉比离心后要好很多。

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发表于 2015-2-23 23:48 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 nn255 于 2015-2-23 23:47 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
你加抗体了吗？细胞是不是染菌了！

加抗体了，估计传小皿时污染了，好多黑点，我给扔了。

prettygirl@[使用道具]
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发表于 2015-2-23 23:48 资料个人空间短消息加为好友

小中大

你好，我也在培养心肌细胞，不过和你的不一样。你可以告诉我，你们的培养基及培养条件吗?
我想比较一下，谢谢~

木槿[使用道具]
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发表于 2015-2-23 23:49 资料个人空间短消息加为好友

小中大

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原帖由 prettygirl@ 于 2015-2-23 23:48 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
你好，我也在培养心肌细胞，不过和你的不一样。你可以告诉我，你们的培养基及培养条件吗?
我想比较一下，谢谢~

好的。我的培养基是高糖的DMEM11995(GIBCO公司)，加双抗0.5%，FBS10%；培养条件就是37°，5%CO2培养箱培养。前辈，你们是怎么培养的呢？我们就是按着ATCC上细胞的培养方法培养的。

木槿[使用道具]
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发表于 2015-2-23 23:49 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

我们是将冻存的细胞37°水浴箱迅速摇晃使其溶解，之后将冻存液放入盛有2ml的培养液的离心管中，1000转转5min，之后将上清出去，加入2ml的细胞培养液，之后吹打使细胞悬浮，放入10cm培养皿中，加入培养液至7ml，上下左右摇匀，放入培养箱培养。前辈是怎么培养的呢？能告诉我么？

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发表于 2015-2-23 23:49 资料个人空间短消息加为好友

小中大

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原帖由木槿于 2015-2-23 23:49 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

我们是将冻存的细胞37°水浴箱迅速摇晃使其溶解，之后将冻存液放入盛有2ml的培养液的离心管中，1000转转5min，之后将上清出去，加入2ml的细胞培养液，之后吹打使细胞悬浮，放入10cm培养皿中，加入培养液至7ml，上下左右摇匀，放入培养 ...

首先，我不是什么前辈。我也是个初学者。呵呵
我做的是斑马鱼的心肌细胞的原代培养，情况不是很好。
做的是组织块的培养，3天左右迁出细胞，但是到第8天细胞就开始死亡。还没有得到较多的细胞。
也不知道是什么原因？因为我们的温度比你们低，我昨天测pH是6.7，感觉这个条件下细胞才迁出，因此以前做不出来可能与pH有关。因此问问你。

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发表于 2015-2-23 23:50 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我不是什么前辈，我也是个初学者。呵呵
我们实验室养的是斑马鱼的胚胎成纤维细胞。
就我知道的细胞复苏的方法有2种。1.离心。2。直接铺板法（稀释DMSO的方法）。
我们实验室复苏细胞的具体做法是：
      首先放到37度水浴，迅速摇晃，待里面还有一小块冰的时候就开始停止摇晃，这样做的原因是DMSO在常温下对细胞有毒，所以留一小块冰，不至于很快恢复到室温。
      由于在常温下，DMSO在低于1%时对细胞的毒害很小，而冻存液中的DMSO是10%的，因此要稀释10倍。所以，我用的是向75cm2的大培养瓶中加入大概10ml 的培养液，然后将解冻完的细胞液加入到上述培养瓶中，加的时候是先沿着培养瓶壁慢慢的加，培养瓶要轻轻的晃动，这个主要是防止渗透压的突然改变而对细胞有伤害。加了一些后就可以快一点加了。
      加完后立即放入培养箱内，24h左右观察是否贴壁。根据贴壁的情况来判断是否换液。

   以前也试过离心的方法，感觉没有这个方法好。这个方法我觉得比较简便。当然有些细胞也不适合这个方法。具体的我也忘记了。呵呵
   祝你顺利！

木槿[使用道具]
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发表于 2015-2-23 23:51 资料个人空间短消息加为好友

小中大

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原帖由 prettygirl@ 于 2015-2-23 23:50 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
我不是什么前辈，我也是个初学者。呵呵
我们实验室养的是斑马鱼的胚胎成纤维细胞。
就我知道的细胞复苏的方法有2种。1.离心。2。直接铺板法（稀释DMSO的方法）。
我们实验室复苏细胞的具体做法是：
首先放到37度水浴 ...

好的。我知道了。谢谢你。我想问一下你做细胞是要做缺氧诱导吗？我是准备做缺氧诱导的。

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