小中大【求助】细胞免疫荧光
以上是我做免疫荧光的结果,重复了好几遍了,最终效果都不好,那个前辈可以传授点经验。
我的实验步骤如下:
PBS洗,4%多聚甲醛固定20min,0.2%吐温20通透10min(膜受体),PBS洗
10%血清封闭30min,PBS洗,加一抗37℃孵育2小时,PBS洗2×2min
加生物素化二抗37℃孵育30min,PBS洗2×2min,SABC-FITC染色30min,PBS洗2×2min,DAPI染色5min
PBS洗2×2min,抗淬灭剂封片。倒置荧光显微镜拍照。
上面两张空白对照,下面两张为实验组。