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标题:【求助】原代培养，睾丸间质细胞不贴壁

ququer787[使用道具]
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发表于 2015-2-25 14:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】原代培养，睾丸间质细胞不贴壁


       恳请走过路过的大侠们帮忙看看，我的细胞为啥不贴壁！！
       我自认为操作没问题，做前紫外，开风机通风，DMEM/F12培养基，12％胎牛血清，双抗也加了，0.25％胶原酶消化。也铺过0.1％明胶，按说24小时就该贴壁，可我的直到第3或4天才贴. 我都过了半年了，急死了快，请大家帮分析下（前2张是第3天的，最后一张是刚消化好拿去培养的）


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2015-2-25 14:51
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2015-2-25 14:51
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2015-2-25 14:51
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wiwi[使用道具]
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发表于 2015-2-25 14:54 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
人的组织？
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发表于 2015-2-25 14:54 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
有没有加DMSO？
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wood533[使用道具]
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发表于 2015-2-25 14:54 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

如果培养基的pH等都是正确的话，可以尝试加一些贴壁因子，如FBFβ等促进其贴壁。
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ququer787[使用道具]
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发表于 2015-2-25 14:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 wiwi 于 2015-2-25 14:54 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
人的组织？

这是小鼠的，看文献上说的，很容易呀，但点背的我总是养不活。求帮助！！
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ququer787[使用道具]
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 小中大


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原帖由 wood533 于 2015-2-25 14:54 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

如果培养基的pH等都是正确的话，可以尝试加一些贴壁因子，如FBFβ等促进其贴壁。

请问FBF是什么东东？
我用过0.1％明胶。还是不行。
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ququer787[使用道具]
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发表于 2015-2-25 14:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 memory 于 2015-2-25 14:54 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
有没有加DMSO？

DMSO 不是冷冻时才需要吗？
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jingling845[使用道具]
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发表于 2015-2-25 14:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

二甲亚砜是个很神奇的东西，具体你可以去查文献，我们老师讲的时候要求有一定浓度的二甲亚砜
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caihong[使用道具]
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发表于 2015-2-25 14:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
小鼠的比大鼠的难养一些。大部分都会死，很少会贴壁。养的时候可以将多个鼠的睾丸组织消化后的滤液合并到一起离心。在消化的时候千万不要弄断曲细精管。消化过程中最好不断的震荡。不要消化超过40分钟，消化到曲细精管散开但是不断裂就可以。另外小鼠的品系也有一定关系，c57比8bc的原代要好养一些。一般24小时就会贴壁，培养一代以后3beta-HSD鉴定一下就OK。
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ququer787[使用道具]
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发表于 2015-2-25 14:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 caihong 于 2015-2-25 14:57 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
小鼠的比大鼠的难养一些。大部分都会死，很少会贴壁。养的时候可以将多个鼠的睾丸组织消化后的滤液合并到一起离心。在消化的时候千万不要弄断曲细精管。消化过程中最好不断的震荡。不要消化超过40分钟，消化到曲细精管散 ...

您好，看到您的回复我很激动，您真是专家级别的呀！！！我会按您说的改进下，非常感谢！！

那个3β-HSD您用过吗？我现在已经买了
NRT：硝基四氮唑蓝 。。。
NAD：烟酰胺腺嘌呤二核苷酸
DMSO也有，只剩下那个DHEA：脱氢表雄酮，没买到，因为试剂公司说要三千多块钱，请问您用过吗？买的这个有这么贵吗？
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