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标题:【求助】cAMP ELISA 检测

yjf1026[使用道具]
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发表于 2015-2-25 15:02 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】cAMP ELISA 检测


大家好，请教大家几个关于cAMP含量测定的问题哈！
首先，我要检测的对象是精子细胞；打算用的方法是ELISA；
我的问题：
1.cAMP应该是核苷酸衍生物，那么用ELISA进行检测的原理是什么呢？（不是抗原抗体反应吗？那抗原一般不应该是蛋白质吗？那cAMP是如何发生抗原抗体反应的呢？）
2.cAMP是细胞中的第二信使，产生也应该是在细胞中产生的，而且cAMP水解的速度远远大于生成的速度，那么细胞中的cAMP容易检测到吗？（对细胞处理有没有什么特殊要求呢？在进行ELISA检测之前该如何对精子细胞进行处理呢？）
先谢谢大家啦!
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chuntian1983[使用道具]
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发表于 2015-2-25 15:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
cAMP水解速度是比较快，但是刺激细胞产生cAMP的同时还要加一种化学试剂抑制cAMP的水解，这样cAMP会在细胞内累积起来不会水解，我记不起来cAMP水解抑制剂了。有很多公司生产检测cAMP的试剂盒，但是价格不是一般的贵，一般一个96-well的试剂盒的价格是300美元，除去你要做标准曲线的孔，能用于测试样品的只有70个孔。很是烧钱。
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idea2011[使用道具]
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发表于 2015-2-25 15:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

1. Antibody can be prepared against cAMP and polysacchrides, not just protein.
2. During sample preparation, you do need to add inhibitor of cAMP phosphodiesterase, such as 3-Isobutyl-1-methylxanthine (IBMX, a non-specific inhibitor of cAMP or cGMP phosphodiesterase).
3. ELISA is expensive and may not be sensitive, you can try radioimmunoassay.
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jingling845[使用道具]
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发表于 2015-2-25 15:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
已经很便宜了！
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sistis[使用道具]
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发表于 2015-2-25 15:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

这是个烧钱的实验啊，二楼正解！
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yjf1026[使用道具]
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发表于 2015-2-25 15:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 chuntian1983 于 2015-2-25 15:03 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
cAMP水解速度是比较快，但是刺激细胞产生cAMP的同时还要加一种化学试剂抑制cAMP的水解，这样cAMP会在细胞内累积起来不会水解，我记不起来cAMP水解抑制剂了。有很多公司生产检测cAMP的试剂盒，但是价格不是一般的贵，一般一个96 ...

首先很感谢您的回复哈！
我是想检测获能后精子中cAMP含量的变化，可是看到你的回复后，我又有新的问题了，希望你能帮我分析一下啊：
我所用的精子来源是小鼠，经过HTF获能处理后就将所有收集的精子冻存到负80了，没有加你所说的水解抑制剂
那么我的问题是：我的这些样品是不是就不能进行ELISA检测了呢？
谢谢啊
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yjf1026[使用道具]
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发表于 2015-2-25 15:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 idea2011 于 2015-2-25 15:03 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

1. Antibody can be prepared against cAMP and polysacchrides, not just protein.
2. During sample preparation, you do need to add inhibitor of cAMP phosphodiesterase, such as 3-Isobutyl-1-methylxanthi ...

非常感谢你的帮助哈
我现在又遇到新的问题了，你帮我看看好吗：
我本想检测获能后精子中cAMP含量的变化，所用的精子来源是小鼠，经过HTF获能处理后就将所有收集的精子冻存到负80了，没有加cAMP水解抑制剂，看了大家的回复后，我感觉我的这批样品好像不能再检测cAMP含量了，对吗？不知道还有没有补救办法呢？
谢谢啊
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TAT[使用道具]
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发表于 2015-2-25 15:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

如果是测量精子在自然条件下的cAMP含量，最好是采集之后立即测cAMP的含量。我做cAMP ELISA都是先用某种毒素处理细胞，同时加上“IBMX, a non-specific inhibitor of cAMP or cGMP phosphodiesterase”。然后裂解细胞，收集cAMP,然后用试剂盒检测cAMP 含量。
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yjf1026[使用道具]
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 小中大


QUOTE:
原帖由 TAT 于 2015-2-25 15:05 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

如果是测量精子在自然条件下的cAMP含量，最好是采集之后立即测cAMP的含量。我做cAMP ELISA都是先用某种毒素处理细胞，同时加上“IBMX, a non-specific inhibitor of cAMP or cGMP phosphodiesterase”。然后裂解细胞，收 ...

嗯，看来我的那批精子是不能再用来测cAMP了
还是非常感谢你的热心帮助哈！
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