小中大实验用前处理:
实验仪器和好耗材包括:
恒温水浴锅 溶剂过滤器(带真空泵)1000ml 高速匀质器 黄曲霉毒素免疫M1亲和柱玻璃纤维滤纸 玻璃注射器 无荧光特性玻璃试管 空气压力泵 超声波清洗机 定量滤纸 量筒 样品瓶 容量瓶 移液器或移液管
实验用试剂:色谱乙腈 色谱甲醇 氢氧化钠 石油醚 超纯水或去离子水等等
HPLC条件:
高效液相色谱仪
色谱柱
C18柱,150*4.6mm,5um
流动相
乙腈-水(25:75)
荧光检测器:
激发波长365nm,发射波长435nm;
柱 温
室温
流速
1.0ml/min
进样量
20ul
出峰时间
10分钟左右
样品取样:真菌毒素分析的最大误差来源是样品的收集和取样过程,所以必需保证样品收集和取样具有代表性。
样品前处理:不同样品
牛奶 水浴加热至40度,离心用上清液过柱净化;
乳粉和粉状婴幼儿配方食品:称取适量奶粉样品,用于蒸馏水中,混合均匀使其充分溶解,离心离心用上清液过柱净化;
发酵乳(包括固体状、半固体状和带果肉型):称取适量奶粉样品,用于蒸馏水中,调节PH值至微碱性,高速均质器匀浆,水浴加热后离心,取上清液混合均匀使其充分溶解,离心离心用上清液过柱净化;
干酪:称取适量切细或粉碎,过筛用加纯水溶解,高速均质器匀浆,超声提取后收集上清液,然后用石油醚进行两次萃取,然后用适宜的有机溶液萃取,取若干上清液过柱净化
奶粉样品,用于蒸馏水溶解中,调节PH值至微碱性,水浴加热后离心,取上清液混合均匀使其充分溶解,离心离心用上清液过柱净化;
奶油:称取适量加甲醇水溶解,震荡后分页漏斗取下层溶液,蒸干后溶于水用于过柱净化。
免疫柱净化步骤:完全符合GB/T 18980-2003
┅┅取出免疫亲和层析柱, 恢复至室温,将上方塞子取出斜剪断,再插回亲和柱上。
┅┅将免疫亲和柱连接于玻璃注射器下。准确移取清澈液注入玻璃注射器;
┅┅将空气压力泵与玻璃注射器连接,调节压力使溶液以约2-3mL/min流速缓慢通过免疫亲和柱,直至2~3mL空气通过柱体;
┅┅更换玻璃注射器与亲和柱连接,在注射器中加入10ml水,调节压力使水以约6mL/min流速清洗亲和柱。
┅┅准确加入4mL色谱级乙腈洗脱,流速为1 mL/min ~2mL/min,收集全部洗脱液于玻璃试管中,供检测。
注:收集管中的洗脱液即为纯化后的样品,可直接用ELISA,荧光和高效液相等方法检测。
HPLC 检测需要仪器与耗材
产品名称
说明
黄曲霉毒素M1固体标准品
参比对照使用
黄曲霉毒素M1液体标准品
浓度0.5ug/ml, 溶于乙腈
PriboFast 黄曲霉素M1免疫亲和柱
用于 样品前处理柱 分析黄曲霉素
PriboFast泵流操作架(8位)
用于免疫亲和柱净化样品处理,方便控制流速
黄曲霉毒素检测专用玻璃纤维滤纸
用于去除HPLC检测时部分杂峰,有效提高灵敏度。110,1.5um
不锈钢均质器
高速匀浆样品,有效提高萃取效率
旋转蒸发仪-超声波发生器等配套设备