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标题:【求助】液体培养后丝状真菌的扫描电镜

xgy412[使用道具]
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发表于 2015-3-4 12:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】液体培养后丝状真菌的扫描电镜

我想做一下液体培养后丝状真菌的扫描电镜。
     实验室的人都是做细菌的，他们是把菌液滴在盖玻片上，等菌液干后加戊二醛固定，然后漂洗，梯度脱水再干燥。我按照他们的方法固定后漂洗的时候菌丝老是浮起来洗丢掉。而且再盖玻片上操作也比较麻烦。想用离心的方法，就是加试剂处理后离心，可是菌丝根本离不下来，14000转都不行，想问一下各位高手：
    怎样固定住才能使加液体时菌丝不再飘起来？
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QQ爱[使用道具]
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发表于 2015-3-4 12:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【回复】

真菌需要用乳酸棉兰染色，显微照相才能看的清楚。不知道你的真菌是在固体培养基上培养的，还是震荡培养的？
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hcy517[使用道具]
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发表于 2015-3-4 12:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【回复】

要看菌丝还是孢子？要看菌丝还是孢子？
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发表于 2015-3-4 12:13 资料  个人空间 短消息  加为好友 QQ

 小中大

【回复】

干燥后再加戊二醛固定菌不就失水变形了吗？
    漂洗的时候用水还是缓冲液呢？用水的话菌丝应该很容易变形吧？怎样尽量保持菌的形态不变？
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兔子[使用道具]
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发表于 2015-3-4 12:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【回复】

其实菌丝不像细菌那么小，一般在光学显微镜下，染色就能看清形态，而且操作简单，菌丝也不会变形。
你用的是电镜扫描处理样本的通常方法，要是必须用电镜的话，你可以试试更换脱水梯度和时间，脱水过程温和一些，变形情况会好转。
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发表于 2015-3-4 12:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【回复】

谢谢，是必须要用电镜，因为要观察细胞壁
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jishiben[使用道具]
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发表于 2015-3-4 12:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【回复】

可以使用固体培养基培养，盖玻片插片法制片子.
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xgy412[使用道具]
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发表于 2015-3-4 12:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【回复】

麻烦再问一下，我同时也做了固体平板上的电镜制片。按文献讲的：从菌落上切琼脂块薄片，然后固定脱水等等。我做完干燥之后，发现薄片不再是平的，变卷曲了，想问下还能用吗？扫描电镜的样品是否必须是平的？
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小熊妮妮[使用道具]
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发表于 2015-3-4 12:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【回复】

对于菌丝会浮起来的问题，很难解决。但是你说变形的话，倒不像你说的那样，戊二醛既然是固定剂，就是为了保持菌体的形态不发生大的变化。我做过细菌的固定，戊二醛和锇酸是固定剂，而后面用乙醇梯度脱水后再用乙酸异戊酯置换，形态会好些。
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