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标题:[未解决]超滤离心游离药物浓度高于血浆总浓度？

  [未解决]本主题悬赏 可用分 10  
苍云朗空[使用道具]
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发表于 2011-2-20 10:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

超滤离心游离药物浓度高于血浆总浓度？

用Millipore的超滤离心管超滤血浆后使用LC-MS测血浆游离药物浓度，测得的浓度比血浆总药物浓度高，这是为什么呢？
超滤前血浆是100微升，超滤后的滤液不到50微升。是否这个过程浓缩了血浆中的游离药物？测总浓度用的血浆是50微升。
使用超滤装置如何将测得的数据换算成实际样品浓度？
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  • miracle   2011-2-20 11:25  可用分  +2   鼓励新手发帖交流！欢迎常来！ ...
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猴子[使用道具]
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发表于 2011-2-20 10:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #1 苍云朗空 的帖子

前处理既然存在浓缩过程那就必然要把这个浓缩值折算进结果里去了，比如你这个浓缩到一半，那结果的浓度也就得除以2；或者将浓缩后的样品稀释到原来的体积再进样。
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  • miracle   2011-2-20 11:25  可用分  +3   感谢朋友帮助解答！辛苦了。
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苍云朗空[使用道具]
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发表于 2011-2-20 12:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #2 猴子 的帖子

在不知道超滤后液体的精确体积时如何稀释？如何将浓缩后的样品稀释到原来的体积？
有人告诉我说要通过称重来确定体积，但在不同样品的蛋白浓度导致液体密度不同时，这种方法也不妥当。
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PURPOSE人生[使用道具]
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发表于 2011-2-20 18:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
做一个回收率试验看看，如何差太远就是方法不合理，超滤过程中损失的那一部分溶液哪里去了？高了多少？
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amelican_beauty[使用道具]
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发表于 2011-2-21 10:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #1 苍云朗空 的帖子

有的药物在血浆中会和蛋白发生Binding,利用超滤离心管可以分离binding上的和未binding上的（即游离的），未binding上的药物应该在滤液里，而binding上的在滤纸的上层。从这很容易看出未binding上的肯定比总浓度低，你超滤前是100mL，超滤后滤液是50mL，很明显你的浓度提高了1倍。
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苍云朗空[使用道具]
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发表于 2011-2-21 12:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
谢谢楼上的解答。有个问题：稀释试验如何操作？超滤前稀释，还是超滤后稀释？
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猴子[使用道具]
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发表于 2011-2-21 17:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #6 苍云朗空 的帖子

稀释是一个前处理步骤，要想知道任何处理前某一物质的实际浓度，稀释倍数是必需要准确知道的。超滤也是一前处理步骤，此步骤的关键是要“转移完全”。

取样m0 g （或v0 ml），超滤，转移到v ml的容量瓶，定容，进样测得直接结果为c mg/ml；那么在原样品中的实际浓度为c×v/m0×1000 ppm（或c×v/v0 mg/ml）。
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zxlyid[使用道具]
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发表于 2011-2-27 11:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
先计算物质的质量，然后根据体积变化算浓缩变化，得到浓度变化。
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Doctorcbw[使用道具]
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发表于 2011-2-27 11:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 苍云朗空 于 2011-2-21 12:26 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
谢谢楼上的解答。有个问题：稀释试验如何操作？超滤前稀释，还是超滤后稀释？

应该是越滤后再做这个稀释试验吧
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ttkl533[使用道具]
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发表于 2011-2-27 11:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 QQ

 小中大

回复 #1 苍云朗空 的帖子

你的超滤目的就是去掉样品中的蛋白大分子，你的样品是小分子物质，尽管可能会有一部分操作损失，但是是可以透过超滤膜的。理想情况下，假设样品完全通过，但样品体积缩小一倍，这个就是浓缩了一倍。

你可以用空白血浆加标，测定一下你方法的回收率。然后利用回收率来换算你实际样品的浓度。

如果你样品中的待测物质的浓度超过定量限，不需要浓缩的话，个人觉得应该是超滤后定容到100UL。

这些都要测定方法回收率，然后换算实际样品浓度的。
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