液相色谱

液相色谱问题，请教一下各位，我连续3针进样，主峰保留时间依次延长，峰面积依次增大，RSD远远超过2%~~~
之前没出过这样的问题，方法用了一年半多了，比较可靠
流动相是0.1%三氟乙酸水，0.1%三氟乙酸乙腈，流动相中的三氟乙酸、水、乙腈都经过严格处理的
柱温25度，样品室液5度，样品平衡时间1个小时，然后进了3针空白~~~~
洗脱梯度
时间（min）      流速（ml/min）            A(%)               B(%)
                                 1                                    90                   10
          2                     1                                    90                   10
          20                  1                                    80                   20
          35                  1                                    25                   75
          36                  1                                     90                   10
          45                  1                                     90                   10

机器是Waters 2695,先后换用过3台仪器，柱子是Symmetry sheild RP18，先后换用过3根，情况还是这样
奇怪的是把进样体积由10微升改为5微升后，情况能好很多

之前做了那么长时间没问题，忽然间出现这个情况，怎么做都是这样，请各位帮我出出主意，谢谢了

有柱温箱吗？进的是样品还是对照品

定量环的满量程是多少？是不是定量环不准了，建议好好清洗下定量环。还有样品是不是有问题了？溶解的不完全或者什么原因。

出峰时间依次延长，一、有可能是温度影响，看柱温箱有没有问题。二、有可能是哪里漏液了。
峰面积增大，进样量的问题的可能性最大，看你定量环是多大的，是不是满量程进样。如果满量程进样要超过3~5倍的进样体积才准确，要不就会出现峰面积变化的情况。

减小进样量倒好了，难道过载了？样品是新配的吗？

是不是系统还不稳定呀？

进样浓度是多大，主要考虑样品超载问题

1.系统有渗漏。2.温度（特别是环境）有波动。3.流动相过滤不到位。4.压力越来越小。

从楼主的描述来看，之前同条件做过很多次没问题，那么你的流动相和仪器方面的问题不大。

几个建议：

1、样品用流动相溶解，保持和流动相酸度一致。

2、进样后洗针采用流动相洗。

3、平行样分析时间的间隔不要太大。

可能是梯度混合器出了问题。导致你的实际使用的B%的比例有变化，而且没有实际的强。
可以用实验方法，排查混合器是否有问题。

有柱温箱，温度设过25度和35度~~~~进的是样品~~~~进样5微升，重复性很好，但是进样10微升，就出项一针比一针峰高，一针比一针保留时间长

定量环是200微升的，即使不准出峰位置也该相同，而且以前做的没什么问题~~~~样品应该没问题，溶解性很好，而且过滤过~~~进样5微升，重复性很好，但是进样10微升，就出项一针比一针峰高，一针比一针保留时间长

我换过3台机器，都出现这样的情况~~~定量环是200微升，我进样10微升~~~进样5微升，重复性很好，但是进样10微升，就出项一针比一针峰高，一针比一针保留时间长