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标题:【求助】AFLP产物银染条带很淡

nvdabing[使用道具]
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发表于 2015-3-11 15:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】AFLP产物银染条带很淡


各位朋友，本人最近做了一个多月的AFLP，结果银染条带都是很淡，我换了很多方法（包括酶切方法、T4连接方法、pcr反应程序等等），可是银染结果依然很淡，淡的看不见条带，求高手指点！（我看网上很多说银染好坏跟温度有关，我实验室没有空调，都是室温银染的，不知道有没有影响！）


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2015-3-11 15:27
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2015-3-11 15:27
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发表于 2015-3-11 15:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

EB染色不可以吗？我以前做RFLP和ERIC都是用EB染色的。条带清晰。
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发表于 2015-3-11 15:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

AFLP应该也可以用EB染色，不过操作时要注意。只要你提的DNA比较纯，PCR条件控制得当，条带清晰没问题。
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发表于 2015-3-11 15:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

让我想起6年前的实验。 请问你的显影液放在冰水里预冷了没有？甲醛，硝酸银，显影液都要十分的纯净，我当时用的都是ACS 级的试剂，MILIQ水，在室温下显影可以得到不错的结果。
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nvdabing[使用道具]
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发表于 2015-3-11 15:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


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原帖由 mercedes 于 2015-3-11 15:28 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

AFLP应该也可以用EB染色，不过操作时要注意。只要你提的DNA比较纯，PCR条件控制得当，条带清晰没问题。

可以采用EB染色吗？我跑的是大板垂直胶，60多孔板，用EB染色怎么拍照啊？
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发表于 2015-3-11 15:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我感觉是你的DNA模板浓度不够，你看你的marker条带不是很清楚吗？建议做PCR时加大模板浓度试试。
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 小中大


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原帖由 nvdabing 于 2015-3-11 15:29 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

可以采用EB染色吗？我跑的是大板垂直胶，60多孔板，用EB染色怎么拍照啊？

我跑的是6%变性胶，不是琼脂糖，难道6%变性胶也可以用EB嘛？
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发表于 2015-3-11 15:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


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原帖由 nvdabing 于 2015-3-11 15:29 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

可以采用EB染色吗？我跑的是大板垂直胶，60多孔板，用EB染色怎么拍照啊？

你查查文献看看，我没做过AFLP，以前做RFLP和ERIC都是小板胶。EB染色后用线紫外光透射仪，其自带凝胶成像处理系统可以拍照。
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nvdabing[使用道具]
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发表于 2015-3-11 15:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


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原帖由 ququer787 于 2015-3-11 15:29 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

我感觉是你的DNA模板浓度不够，你看你的marker条带不是很清楚吗？建议做PCR时加大模板浓度试试。

是DNA模板浓度不够吗？有人告诉我说是我预扩产物稀释倍数太少（10倍），建议我稀释500-1000倍。我是采用天根动物组织提取试剂盒提取的，不存在浓度不够问题！
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nvdabing[使用道具]
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 小中大


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原帖由 KGZ564 于 2015-3-11 15:30 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

你查查文献看看，我没做过AFLP，以前做RFLP和ERIC都是小板胶。EB染色后用线紫外光透射仪，其自带凝胶成像处理系统可以拍照。  

EB不行吧，就算行，大板胶那么大也放不进凝胶系统拍照啊！不过还是谢谢你！
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