【求助】菌落PCR中的问题

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标题:【求助】菌落PCR中的问题

iii_ii[使用道具]
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发表于 2015-3-11 17:23 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我是直接在平板上挑菌加入到pcr反应体系中，试剂及反应条件都是没有问题的，我们做的是16Ｓ通用引物，结果出现了比marker最大片段1500bp大好多的条带不知道是怎么回事。求高手赐教~~~~

附件

2015-3-11 17:23

未命名.jpg (10.6 KB)

lgm[使用道具]
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发表于 2015-3-11 17:24 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我一般挑出菌落液体培养基要10个小时以后再拿菌液做PCR,直接那菌落出现这种情况个人感觉有可能是挑的菌落中的菌太多，直接跑出来细菌的质粒或者基因组

qianqin1977[使用道具]
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发表于 2015-3-11 17:24 资料个人空间短消息加为好友

小中大

你挑单克隆把菌摇起来以后,用菌液做PCR试一下

remenb[使用道具]
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发表于 2015-3-11 17:25 资料个人空间短消息加为好友

小中大

这个有可能是你的引物在菌的基因组中扩增的结果，而不是在你的质类上扩增

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发表于 2015-3-11 17:26 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 lgm 于 2015-3-11 17:24 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

我一般挑出菌落液体培养基要10个小时以后再拿菌液做PCR,直接那菌落出现这种情况个人感觉有可能是挑的菌落中的菌太多，直接跑出来细菌的质粒或者基因组 ...

有可能，谢谢啦。不是菌太多久抑制反应了吗？但是我看16Ｓ有有P出来的。。。。

gmjghh[使用道具]
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发表于 2015-3-11 17:26 资料个人空间短消息加为好友

小中大

感觉菌液的纯度有问题,划线以后再挑斑重新检测

iii_ii[使用道具]
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发表于 2015-3-11 17:26 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 gmjghh 于 2015-3-11 17:26 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

感觉菌液的纯度有问题,划线以后再挑斑重新检测