液相色谱

请教大家，同一个样品用两种液相色谱条件检测的结果不一致（归一化法），一个色谱条件是乙腈-0.1%磷酸=40:60，主峰保留时间为4min，杂质A含量约0.15%。另一个是乙腈-水（0.4%HAC，0.1%TEA）=44:56，主峰为16min，采集时间足够长，完全可以检测到A，但是杂质A没有出峰。柱子都是C18柱，牌子不一样。
另一个问题，做旋光测试时，同一份样品用两根长度不一样的旋光管，测出来结果偏差比较大，可能是什么原因？另外，同一批样品，配制两份溶液，比旋度测出来也不一样，为什么呢？

[ 本帖最后由 shadow809 于 2011-3-9 17:31 编辑 ]

检测波长呢？

ph的影响很大啊，从你的条件看，楼主测测2个流动的PH差多少？

检测波长244nm，pH值分别为2.4,4.3

你的杂质A很有可能是个离子型的化合物，你用0.1%磷酸，杂质A能出来，说明0.1%的磷酸起到了缓冲的效果，能控制住杂质A的离解，而用第二个缓冲盐没出现，说明它没起到这个效果。

你要搞明白旋光度不等同于比旋度，旋光管的长度，溶液的浓度都会影响旋光度的值，但不会影响比旋度的值的。你问这个问题，说明你不知道比旋度的计算方法。翻翻药典你就明白了。

是我写错了，我的意思是比旋度测出来结果不一样，但是都在范围之内。

HPLC部分，你色谱柱的牌子不同，长度及内径，填料粒径相同否？若不同出峰时间肯定是不同的，若只这样，出峰早的杂质分不开是正常的。旋光测定时结果处理时有没有把光径计算进去？左旋右旋有没有考虑？还有放旋光管的方向？

两个液相分析方法 不太好比较
不同品牌柱子性能不一样的 哪怕规格都一样
用同一个流动相 保留时间都有所差别
建议你还是统一方法比较好

旋光的话 不同样品比较 应该是使用同一根管子更合适
而且应该做空白
同一样品差异大，会不会你样品本身就不均匀
另外 硬件上是否有问题也需要考虑

1.有可能是柱子的原因 不同柱子有些杂质是不能检测到，你可以试试两个流动相下 同一柱子是否出现这种情况，以排除是否柱子的原因。
2.  [a](t,D)=  100a/LC   
L为测定管长度，dm；
α 为测得的旋光度；
c 为每100ml溶液中含有被测物质的重量，g（按干燥品或无水物计算）可见比旋度与管长有关。

流动相条件不同，杂质很可能就不能被洗脱下来~

我觉得是流动相的跟换引起杂质的响应变小，或有变化