液质联用

我用内标法做定量。标准曲线做完了，但实际样品的测定却不理想。有的能测到，有的连内标也不见了。因为理论上浓度不应该这么低，所以我知道肯定是处理或测定过程中有问题。现在不知道问题到底是不是在质谱，所以想和做过血样的前辈探讨一下。

是啥目标物质都不说一下?

目标物是个碱性化合物，很稳定。在甲醇里存放和血中存放的稳定性都还挺好。内标也很稳定。给大鼠灌胃给药，然后取血。药物浓度也比较大。但有的就测不到了。

溶解性呢，你咋个提取的，目标化合物水中溶解度怎么样，有机溶剂中呢，

你是直接沉淀蛋白取上清过滤进样的么?

做过加样回收率实验吗？标准曲线用空白血浆了吗？

可能是血样的基质抑制了样品的电离!

谢谢！

溶解度在水里和有机里都很好，标准曲线和精密度，

回收率都做了，是用血做的。

你做方法学的时候没问题，但是做实际样品的时候出了问题，而且连原来能出峰的内标都不出峰了，

说明，你做方法学时用的提取方法并不适合用于实际样品，我不知道你做回收率时候的空白血来源是怎么样，长期存放的？血站买的新鲜空白血浆，还是受试者未服药前抽取空白血，

也看不出来你用全血做的还是血清或者血浆，不好说什么.

这是介质效应。当分析复杂介质，如血样、尿样、脑组织等，更据我的经验（我分析了约80个药物），约70％的药物会发生介质效应，也就分析是对照品灵敏度很高，但把对照品加入介质后，灵敏度将会下降，且这种效应与介质、提取方法及分析目标药物相关，有些药物十分明显，可能10次进样后，连色谱峰都看不见了，如环孢霉素、胺碘酮、奥曲肽等，下面是我一些建议，虽不能完全解决，但应该有用：

1）样品处理时，避免不挥发性试剂，可用氨水代替氢氧化钠等。同时样品离心的速度尽量块，时间尽量长

2）分析碱性药物流动相中加入适当三氟乙酸（有腐蚀作用，浓度不能高于0.01％）

3）尽量采用沸点较低、纯度较高的试剂提取药物。

4）隔定期的时间清洗锥孔、毛细管等。

5）采用结构类似的物质作内标。

[ 本帖最后由 firefox 于 2007-8-18 13:24 编辑 ]

楼上的朋友，发贴的楼主已经做了血样的加样回收率,他所叙述的情况并不完全是您说的:"对照品灵敏度很高，但把对照品加入介质后，灵敏度将会下降，"这样的问题，

但是，我同意这是介质效应。根本上应该是楼主做方法学用的空白介质和实际样品的介质有一定的差别,导致方法学时的提取方法不适用于实际样品，

其实千变万变不离其宗,只要在样品处理上下足够的工夫,做足功课,后面的色谱分析就会相对稳定轻松，介质效应自然不是问题，不管是紫外还是质谱.

楼上的朋友，我只是描述及定义一下介质效应的特点，就楼主提供的信息而言，是不完整，也是不科学的，我追加的建议如下:

1）考察介质效应：处理几份实际血样，连续进样20次以上，分析药物及内标峰面积变化趋势。

2）处理5条标准曲线：用实际空白的血样处理5条标准曲线，并按统计规则计算斜率及截距有无明显差别，如果检验不能通过，说明存在未知影响较大的误差。另外还要考察其他验证参数。

3）如果以上不能通过，试图更改样品处理方法及色谱条件，在不行，考虑使用别的公司的仪器，因为不同公司的仪器介质效应严重程度不同。

4）楼上的朋友对质谱很有研究，但似乎对体内药物分析复杂性估计不足。就介质效应而言，我上贴以描述了部分特点，但对于介质效应很强的物质，就不是“只要在样品处理上下足够的工夫”所能解决的。我觉得做简单基质的方法与做复杂基质方法实在不可同日而语。有关问题以后有机会探讨吧。