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标题:[未解决]氨基酸含量检测的时候测定的是产品中游离氨基酸含量吗？

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发表于 2015-3-14 14:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

氨基酸含量检测的时候测定的是产品中游离氨基酸含量吗？

氨基酸含量检测的时候测定的是产品中游离氨基酸含量吗？这种含量是蛋白质完全水解得到的吗？还是部分水解+产品中原来含有的游离氨基酸含量？有没有人知道呢？
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kaixinjiuhao[使用道具]
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发表于 2015-3-14 14:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
盐酸水解法之后氨基酸自动分析的话是测定总的氨基酸包括游离氨基酸，茚三酮比色法测定的一般是总的游离氨基酸，而分离蛋白或者限制蛋白水解条件下进行高效液相色谱分析测定的是各游离氨基酸的含量
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发表于 2015-3-14 14:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
如果把蛋白质沉淀分离掉，然后进行柱前衍生或者氨基酸自动分析仪就是分析的产品原来含有的游离氨基酸的含量，而加盐酸水解之后测定的氨基酸是完全水解+产品原来含有的游离氨基酸，因为水解条件都是经过反复试验优化得来的，应该说是完全水解的了。
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美丽婷婷[使用道具]
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发表于 2015-3-14 14:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
因为自己也做氨基酸,我来总结一下LS的观点.
1.6N盐酸水解一天后的产物为总氨基酸
2.不水解只稀释定容的方法为游离氨基酸

由于氨基酸在检测器中的相应问题需要进行衍生化.
目前的衍生化分为柱前衍生和柱后衍生两种.
楼上提到的日立8900氨基酸自动分析仪是柱后茚三酮衍生法.此法有一根分离柱和一根反应柱,反应柱后接UV检测器.
柱前衍生我喜欢用PITC衍生,这种衍生方法仅需要一根氨基酸分离柱即可,检测器也是UV检测器
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发表于 2015-3-14 14:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
用的是什么方法测氨基酸的含量 一般在测定前要对样品进行消化 使蛋白质水解
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发表于 2015-3-14 14:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
大部分方法（除凯氏定氮法）测定的都是游离氨基酸含量。至于是不是水解得到的这个就不一定了，一般氨基酸的存在形式有两种，一种是游离态，一种是结合到蛋白质中，如果你限制了蛋白质水解或除去了蛋白，那全部就是游离氨基酸。反之就是部分水解+产品中原来含有的游离氨基酸含量。我想你应该根据自己的测定目标，设定试验条件。希望对你有用。PS，有些氨基酸只有游离态一种形式，即非蛋白组成氨基酸。
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发表于 2015-3-14 14:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
看样品前处理，如果上柱前通过酸水解一夜，就是蛋白样品被彻底水解率，测量的就是全部游离的氨基酸含量，据我所知，一般跑柱子测的都是游离氨基酸的含量
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grace![使用道具]
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发表于 2015-3-14 14:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
用6mol/L的盐酸浸泡过夜，一般14-20个小时，在烘箱中110度放置就可以了，我们测的是二十种氨基酸
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发表于 2015-3-14 14:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
要测氨基酸总量还是要测出种类和含量？用的8900氨基酸分析仪 如果测游离 直接定容过滤进样就行 如果是总氨基酸 需要先酸水解20个小时 然后蒸干定容过滤进样
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发表于 2015-3-14 14:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
一般要做柱前衍生，如果不做，则结果不准，祝你好运~
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